Tim-1新型配体的发现及其功能在防治移植排斥中的作用和机制研究

Tim蛋白是近年来发现的具有重要免疫调节功能的新分子。文献报道Tim-1和Tim-4分别表达于T细胞和APC，互为配体结合介导T细胞的活化。但我们的研究发现T细胞表面存在与Tim-1结合的其他配体，介导T细胞活化抑制。在成功分离该结合蛋白并进行结构分析后，提示该蛋白结构与CD160相符。本课题拟进一步研究该Tim1新型配体的结构和功能。采用抗体、siRNA技术以及基因转染研究阻断、低表达或高表达CD160后对Tim-1介导的抑制T细胞活化、增殖及同种MLR反应的影响，进一步认证CD160为Tim-1的新型配体；探讨发挥细胞调节功能关键的信号分子；采用体内或供体心脏直接基因转染观察其对同种心脏移植排斥反应的防治效果。研究结果将发现Tim-1/CD160分子相互作用的新途径和机制，为深入了解T细胞活化的全貌、更有效地控制T细胞介导的排斥反应提供新的启示，具有重要的理论意义和潜在应用价值

CD4＋T辅助细胞的活化、增殖和分化是抗原特异性免疫反应产生的关键环节。Tim蛋白是近年来发现的具有重要免疫调节功能的新分子。经过三年的研究发现T细胞表面存在与Tim-1结合的其他配体介导T细胞活化抑制。通过Co-IP免疫沉淀分离出Tim-1-Fc与CD4+T细胞相互作用的新型受体，经过测序鉴定新型受体蛋白的结构，发现该蛋白结构与CD160相符。FACS检测发现CD160在CD3+CD28+活化后的CD4+T细胞中高表达。siRNA干扰CD160的表达能够减弱Tim-1-Fc对T细胞活化、增殖的抑制作用，促进IL-2、IL-17等炎性细胞因子的分泌。Westernblot检测发现Tim-1-Fc能够抑制T细胞活化下游信号蛋白ERK、Ark及NF-κB等的磷酸化水平。通过构建慢病毒CD160转染CD4＋T细胞，发现高表达CD160增强Tim-1-Fc介导的T细胞增殖的抑制作用，抑制IL-2、IL-17等炎性细胞因子的表达。在体内，高表达CD160的Tim-1-Fc治疗组能够显著延长心脏移植物存活期，移植物内IL-2、IL-17、CD11b、mRNA表达显著降低，而IL-10表达则升高，病理损害亦明显减轻。上述结果提示CD160是调节CD4＋T细胞功能的重要分子。Tim-1/CD160分子相互作用可能是调控T细胞活化的新途径，这为深入了解T细胞活化的全貌、更有效地控制T细胞介导的排斥反应提供新的启示。