家蚕传染性软化病病毒翻译机制及侵染机制的研究

引起家蚕传染性软化病的病原为家蚕传染性软化病病毒（Bombyx mori infectious flacherie virus，BmIFV），病毒的翻译和复制机制无疑是其侵染宿主机制解明的重要方面。正义小RNA病毒5′端内部核糖体进入位点功能的研究和病毒反向遗传学模型在复制机制研究中的应用正在得到更多学者的关注。本项目将利用杆状病毒表达系统及SP6体外反转录系统，研究BmIFV 5′端内部核糖体进入位点的功能，通过对病毒基因组相关结构及其与宿主因子的相互作用关系的研究，解明BmIFV的翻译起始过程。并在此基础上，探索该病毒的反向遗传学研究体系，研究病毒复制过程中主要相关病毒基因及功能。通过本研究解明BmIFV侵染细胞后，在细胞质中与翻译起始等因子的互作翻译机制，以及病毒部分功能基因在病毒翻译和复制过程中的功能，初步阐明BmIFV侵染家蚕的机制，为家蚕病毒性软化病的药物防控提供参考依据。

家蚕软化病是一类严重影响蚕业生产的病害，家蚕传染性软化病病毒（Bombyx mori infectious flacherie virus，BmIFV）为导致该病害的重要病原之一。为探讨BmIFV的翻译和复制机制，本研究运用生物信息学分析了BmIFV 结构蛋白前的 5′ 端序列，发现其可能具有内部核糖体进入位点（IRES）功能；利用含有双荧光蛋白基因和双荧光素酶基因的两类重组杆状病毒表达系统，验证了不同长度的 BmIFV 5′ 端序列的 IRES 功能，结果显示其不具有种属和组织特异性。说明BmIFV特异性的侵染家蚕中肠组织杯状细胞的特性与其翻译起始的特性无关，可能与其侵染受体的特异性或复制的特异性有关。研究进而利用RNA Pull-down技术分析了BmIFV 5′端与家蚕中肠蛋白的互作，并结合蛋白质组质谱分析发现了多个BmIFV翻译相关蛋白（16种核糖体亚基、3种真核翻译起始因子、1种延伸因子和6种潜在的IRES顺式作用因子）、细胞骨架和膜相关蛋白以及代谢酶等蛋白，进一步的生物信息学和代谢通路分析发现BmIFV的5′端序列在病毒的翻译和复制中具有重要作用。依据对其中的家蚕La蛋白与病毒基因组之间的相互作用分析，推测La蛋白不仅参与病毒的翻译，还参与病毒的复制过程。这些研究结果的发现有利于揭示病毒在宿主细胞内的翻译和复制机制，同时对通过宿主调控来防治该病毒提供参考依据。