家蚕核型多角体病毒对两株特殊家蚕细胞系侵染差异的机制研究

家蚕核型多角体病是蚕业的主要病害，占整个蚕病损失的70％左右，目前没有任何有效的药物控制方法，一旦发生病毒感染，将严重影响蚕丝的产量和质量，因此急需获得控制BmNPV病毒侵染的关键基因，为该病毒的转基因抗性育种提供靶标基因。项目以两种来源相同，但对BmNPV病毒侵染存在差异的两株特殊家蚕卵巢细胞系BmN-SWU1（对BmNPV病毒高度感染）和BmN-SWU2（对BmNPV病毒不感染）为研究材料，构建具有标记基因的重组病毒在共聚焦显微镜下活体观察病毒对两种细胞的侵染过程；利用转基因技术、RNAi技术、免疫共沉淀技术和基因芯片分析技术等关键技术，分析BmNPV病毒对两株特殊家蚕细胞系侵染差异的机制，获得BmNPV病毒侵染的关键基因和BmN-SWU2细胞中与BmNPV病毒抗性相关的基因，可为该病毒的转基因抗性育种提供靶标基因，并可加速抗BmNPV病毒的转基因家蚕品种的培育进程。

家蚕核型多角体病是蚕业的主要病害，占整个蚕病损失的70％左右，目前没有任何有效的药物控制方法，因此急需获得控制BmNPV病毒侵染的关键基因，为该病毒的转基因抗性育种提供靶标基因。项目以两种来源相同，但对BmNPV病毒侵染存在差异的两株特殊家蚕卵巢细胞系BmN-SWU1（易感细胞）和BmN-SWU2（不易感细胞）为研究材料，构建了携带EGFP荧光标记的重组病毒vA4-VP39-EGFP，利用免疫荧光技术和基因芯片技术分析了BmNPV病毒对两株特殊家蚕细胞系侵染差异的机制。研究结果表明： BmNPV病毒能够大量进入易感细胞，而只有少量病毒能进入不易感细胞。⑵BmNPV进入BmN-SWU2细胞后，病毒的晚期和极晚期基因表达会受到抑制，而早期基因表达不受影响，且不易感细胞在病毒感染早期就检测到宿主细胞蛋白合成关闭。⑶虽然两株细胞都来自同一组织，但与细胞组成、免疫进程、刺激反应和翻译调节等相关基因的表达存在较大差异。同时， Q RT-PCR结果证实与免疫相关的蛋白在不易感细胞中高量表达。（4）获得BmN-SWU2细胞中与BmNPV病毒抗性相关的候选基因3个。上述结果证实了BmNPV病毒对两株特殊家蚕细胞系的差异侵染受到宿主细胞多因素控制，其中病毒粒子侵入和基因组复制是造成BmNPV对BmN-SWU2细胞不易染的主要原因。