结核性脑膜炎患者脑脊液B细胞吞噬功能及其在发病机理中作用的研究

Tuberculous meningitis(TBM) is an apyetous infection of the Central Nervous System caused by Mycobacterium tuberculosis(Mtb), the increased neutrophils proportion in cerebrospinal fluid(CSF) is the landmark o the acute phase and the change to the lymphocyte in the CSF is always an indicate of good prognosis, but the molecular mechanisms is not clear. Our recent study showed that the patients with.intracellular Mtb in the lymphocytes all had good prognosis, and with increased leukotriene B4 (LTB4) at the beginning and B cell activating factor (BAFF) later; While the patients with poor prognosis had a persistent increased LTB4 and neutrophil levels . In the light of the recent research of professional phagocytosis of B cells and its role in the grabuloma. We speculate that the B cells in the CSFof TBM patients can take up the Mtb and the activation of B cells in these patients can modulate the immune response of Neutrophil and thus alleviate the inflammation damage. This study was aimed to reveal the interplay of immune cell subsets and related cytokines in the cerebrospinal fluid of TBM patients and further explore the professional phagocytosis and activation of B cells in thease patients, so as to make clear the immunological properties and molecular mechanism of TBM.

结核性脑膜炎是结核分枝杆菌引起的非化脓性中枢神经系统感染，其急性期脑脊液中性粒细胞比例增高，随后向淋巴细胞为主型转换是其预后良好的表现，脑脊液中性粒细胞持续存在则提示预后不良，但是其分子机理尚不清楚。我们最近的研究表明，脑脊液B淋巴细胞内检测到结核分枝杆菌的患者预后较好，且仅初期白三烯B4（LTB4）显著增高后，而后B细胞活化因子（BAFF）水平增高；而预后不良患者脑脊液内LTB4和中性粒细胞水平均持续增高，且BAFF水平不高。结合近年来B细胞吞噬功能和对中性粒细胞免疫调节功能的研究进展，我们推测：结脑患者脑脊液B淋巴细胞可以吞噬结核分枝杆菌并调节中性粒细胞的免疫反应，减轻炎症损伤。本研究拟通过对结核性脑膜炎患者脑脊液或免疫细胞亚群及其相关细胞因子的变化，进而明确结核性脑膜炎患者B细胞对结核分枝杆菌的吞噬作用及其和B细胞活化的关系，从而明确结核性脑膜炎脑脊液内的免疫特性。

结核性脑膜炎是常见的中枢神经系统感染性疾病，具有病原检出率低、病情危重和死亡率高的特点。既往研究认为 B 细胞仅可以通过胞饮作用（pinocytosis）或膜成份接触交换（trogocytosis）摄取可溶性抗原或膜抗原 。而最近的研究表明B细胞可能存在吞噬作用，我们也通过改良抗酸染色技术证实了结核性脑膜炎患者脑脊液中 CD20+B 淋巴细胞存在结核分枝杆菌。且脑脊液内检测到CD20+B 淋巴细胞吞噬结核杆菌的患者往往预后良好。人 Raji 细胞（B 淋巴细胞系）也对灭活的卡介苗具有吞噬作用。因此我们推测：B 细胞对结核分枝杆菌的吞噬作用在结核病免疫反应中发挥着保护作用。我们拟：首先通过检测和分析结核性脑膜炎患者血和脑脊液吞噬结核分枝杆菌的 B 淋巴细胞和患者临床症状、病情严重程度、细胞 因子之间的关系，明确 B 淋巴细胞在结核性脑膜炎疾病免疫反应和疾病转归中 的作用；然后通过对结核性脑膜炎患者脑脊液或外周血 B 淋巴细胞与结核杆菌 共培养的标本，使用抗酸染色、免疫细胞化学、流式细胞、共聚焦及透射电镜 等方法明确 B淋巴细胞对结核杆菌的吞噬现象、机理及意义。.经过研究后我们发现，RajiB淋巴细胞与卡介苗进行共培养后，对获得的共培养样本进行流式细胞学分析，并按照是否吞噬了卡介苗而分为了三组，对照组，吞噬组，未吞噬组。随后我们对其进行了RNA-seq，测序分析结果表明，三组之间部分基因存在着较明显的差异化表达，这些基因部分与单核巨噬细胞相关，部分与B淋巴细胞相关，部分与其他外周血基因相关。随后 ，我们进一步应用real-time PCR对上述P值最小的具有差异化表达的12个基因进行进一步的 验证。结果表明，我们选取的基因经检验后并没有具有统计学意义的差别。所以根据我们的检测结果，经 过卡介苗刺激后的 Raji细胞可以对其进行吞噬，但重编程为巨噬细胞执行此项功能的证据不充分。并且其吞噬之后是否可以诱导 B 细胞重编程为巨噬细胞，则需要更进一 步的研究来证明。