双抗原双靶向乳腺癌DNA疫苗的研究策略

DNA疫苗技术是肿瘤生物治疗研究的热点。选择特异的抗原表位及提高疫苗的免疫反应水平发展肿瘤DNA疫苗的关键。本课题拟以幽门螺杆菌（Hp）菌蜕（BG）为递送DNA疫苗的载体构建双靶向的多价乳腺癌疫苗：1.根据乳腺癌细胞同时高表达肿瘤相关抗原HER2/neu和TF抗原的特点，构建以HER2/neu为靶分子的DNA疫苗，并利用表面富含TF抗原的Hp/BG装载DNA疫苗，诱发对癌细胞双重杀伤效应；2.疫苗的双靶向递送作用：BG可被DC主动识别吞噬，提高抗原的递送效率及表达水平（即外源靶向）；HER2/neu与MHC-Ⅱ的分子伴侣恒定链共表达，将表达产物靶向递交给MHC-II分子，进一步提高抗原呈递效率（内源靶向）。本研究的目的是通过分子、细胞和荷瘤小鼠试验验证BG提高DNA疫苗的递呈效率，增强其免疫效果及疫苗的双靶向作用治疗肿瘤策略的可行性，属探索性课题，可为上皮细胞来源肿瘤的免疫治疗提供新思路。

DNA疫苗技术是肿瘤生物治疗研究的热点。选择特异的抗原表位及提高疫苗的免疫反应水平发展肿瘤DNA疫苗的关键。本课题拟以幽门螺杆菌（Hp）菌蜕（BG）为递送DNA疫苗的载体构建双靶向的多价乳腺癌疫苗：（1）根据乳腺癌细胞同时高表达肿瘤相关抗原HER2/neu和TF抗原的特点，构建以HER2/neu为靶分子的DNA疫苗，并利用表面富含TF抗原的Hp/BG装载DNA疫苗，诱发对癌细胞双重杀伤效应；（2）疫苗的双靶向递送作用：BG可被DC主动识别吞噬，提高抗原的递送效率及表达水平（即外源靶向）；HER2/neu与MHC-Ⅱ的分子伴侣恒定链共表达，将表达产物靶向递交给MHC-II分子，进一步提高抗原呈递效率（内源靶向）。本研究的目的是通过分子、细胞和荷瘤小鼠试验验证BG提高DNA疫苗的递呈效率，增强其免疫效果及疫苗的双靶向作用治疗肿瘤策略的可行性。结果：（1）完善了的BG制备方法，成功制备了大肠杆菌BG；（2）构建了靶向MHC-II分子的内源性靶向mIi-Her2/neu以及非内源性靶向HER2/neu DNA疫苗；（3）改进了BG装载质粒DNA的方法，提高了装载效率，保证了稳定的装载效率；（4）体外实验证明BG能够高效进入APC中，有可能提高DNA疫苗的表达水平；（5）建立小鼠乳腺癌模型并使用该模型进行初步动物实验，证实mIi分子能够增强HER2/neu疫苗的免疫抑制效果，而大肠杆菌BG除递送功能外，有可能作为疫苗对乳腺癌产生高效的杀伤效应。创新点：（1）提出使用BG装载靶向MHC-II分子的DNA疫苗研究策略，以同时提高DNA疫苗的表达水平及抗原提呈水平，并进行初步实验；（2）首次发现大肠杆菌菌蜕富含TF抗原，对小鼠乳腺癌抑瘤效果明显，有可能作为肿瘤疫苗为抗肿瘤研究提供新的思路。总之，本研究为靶向乳腺癌疫苗研究建立了相关的技术方法、靶向载体、细胞和动物模型，取得了初步并且良好的研究结果，为后续研究提供了有利的条件。