从活性氧-线粒体功能重塑探讨补肾活血法改善不育症精子质量的分子机制

在前期证实补肾活血法"益精方"临床确切改善男性不育症精子质量，机制研究证实该中药可以提高不育模型精子线粒体功能、抑制细胞凋亡，改善睾丸功能的基础上，结合最新进展，提出男性不育症可能存在睾丸、精子活性氧(ROS)-线粒体功能失衡，而补肾活血中药可以重塑该功能平衡的假说。分别以临床患者、体外培养人精子ROS损伤模型、以及前期建立腺嘌呤最佳量-时-效不育大鼠模型为研究对象，给予中药口服以及血清药理学给药，采用精液生化、酶联免疫、流式细胞技术、线粒体膜电位测定、精子体外培养、Westblotting、PCR扩增、定量PCR等技术方法,分别测定精浆和血清ROS水平、精子和睾丸细胞凋亡、线粒体膜电位、tmDNA损伤以及与精子质量的关系，在此过程中线粒体呼吸链关键酶蛋白与基因表达水平，探讨补肾活血法抑制ROS过度活跃与提高线粒体功能，重塑两者功能平衡，改善精子质量的分子机制，为临床应用进一步提供理论支持

目的：观察活性氧、线粒体功能失衡对特发性少弱精子症的影响及其相关性；从活性氧、线粒体功能、精子凋亡等角度，探究补肾活血法（益精方）治疗特发性少弱精子症的作用机制。方法：实验采用自身前后对照的临床与试验设计方法，观察补肾活血法（益精方）治疗特发性少弱精子症临床疗效，采用流式细胞技术在治疗前后检测精子早期凋亡率、线粒体膜电位（MMP），同时检测精浆SOD、MDA、尿酸情况和舌质、脉象等前后变化情况。观察29例正常对照组作相关参数统计参考。试验共入组特发性少弱精子症患者30例，其中少精子症合并弱精子症患者5例，单纯弱精子症患者25例，给予益精方加减治疗，每1~2周复诊随访1次，连续治疗3个月。结果：1 治疗后5例少精子症患者精子密度均恢复正常，与治疗前比较差别明显（P<0.05），25例单纯弱精子症患者精子密度和数量也有一定提高，但是差异不明显（P>0.1）。2 30例弱精子症患者精子活力、活率和精子正常形态率均明显提高，前后比较差别明显（P<0.05)。3 治疗前精子早期凋亡率为（4.26±2.79）%，治疗后精子早期凋亡率（2.86±1.47）%，平均减少1.40%,前后比较差别明显（P<0.01）。4 精子线粒体膜电位（MMP）丧失情况变化：治疗后MMP正常精子提高24.64%（P<0.01），MMP丧失精子平均降低19.96%(P<0.05)。5 精浆SOD、MDA、尿酸变化：治疗后精浆SOD较治疗前提高，MDA较前降低，差别明显，P<0.05；尿酸水平较前也有提高，但在P=0.05水平差别不明显。6 相关性分析：精子活率、活力与精子早期凋亡率、线粒体膜电位丧失率、精浆MDA水平明显相关。精子密度与精子早期凋亡率和线粒体膜电位丧失率关系密切.。结论：补肾活血法（益精方）可以明显改善特发性少弱精子症患者精子密度和活率，提高正常精子形态率，降低精子早期凋亡率，减少线粒体膜电位丧失率、降低精浆活性氧水平，提高精浆抗氧化酶含量。补肾活血法（益精方）改善特发性少弱精子症患者睾丸生精微环境，提高精子质量，通过至少两个途径发挥作用：第一，改善睾丸、附睾功能及精子发生的微环境，从而降低精子的凋亡率，提高精子活率和密度；第二、改善前列腺、精囊腺等附属性腺功能，提高精浆抗氧化酶浓度，降低精浆的高氧化应激状态，从而减少精子的氧化应激损伤、提高活率。.