高表达α1D受体CMC/MS-FAC联用法研究配体-受体动力学

配体-受体之间的特异性作用是受体或配体分子发挥生物学功能的开始，二者之间结合是特异性的、可逆性的。目前，研究配体-受体结合动力学的方法，如功能受体分析法、放射配基结合分析法和受体亲和色谱法，存在高污染、低效、低准确率、非动态或"失真"等缺点。本研究在原细胞膜色谱的理论和技术上，利用细胞分子生物学的方法构建稳定、可控和高度表达的HEK293a1D受体细胞，建立高表达a1D受体细胞膜模型，并利用高表达a1D受体细胞膜模型与质谱(MS)和前沿亲和色谱法(FAC)联用测定哌唑嗪等配体与a1D受体结合反应的解离常数(KD)和受体数量([RT])，定量研究配体-受体动力学，为配体-受体动力学的研究提供一种新的低污染、高灵敏、动态真实地反应配体-受体相互作用的方法。这对于研究配体-受体相互作用基本理论、药物在受体水平的作用和药物筛选等方面具有重要的意义。

配体-受体之间的特异性作用是受体或配体分子发挥生物学功能的开始，二者之间结合是特异性的、可逆性的。目前，研究配体-受体结合动力学的方法，如功能受体分析法、放射配基结合分析法和受体亲和色谱法，存在高污染、低效、低准确率、非动态或“失真”等缺点。本研究在原细胞膜色谱的理论和技术上，利用细胞分子生物学的方法构建稳定、可控和高度表达的HEK293a1D受体细胞，建立高表达a1D受体细胞膜模型，并利用高表达a1D受体细胞膜模型与质谱(MS)和前沿亲和色谱法(FAC)联用测定哌唑嗪等配体与a1D受体结合反应的解离常数(KD)和受体数量([RT])，定量研究配体-受体动力学。结果表明，制备的高表达a1D受体细胞膜色谱固定相上每克含膜蛋白为21.31±4.56mg/g，具有较强活性和可重复性，稳定性良好，对α1D-AR选择性拮抗剂的亲和力具有特异性；建立的高表达α1D受体CMC/MS-FAC联用法具有高灵敏性，能动态真实地反应配体-受体相互作用；测定哌唑嗪等配体与a1D受体结合反应的pKi值分别为8.58、8.16、7.61、7.57、6.98，受体数量为0.26、0.25、0.35、0.33和0.68 pmol bed–1。与CMC-FAC法和RLBA法对比分析说明CMC/MS-FAC联用法测定比CMC-FAC法具有特异性、敏感性和选择性，更能反应配体与受体的相互作用；高表达a1D受体CMC/MS-FAC联用法测定的pKi与文献中RLBA测定结果比较接近，且两种方法测定结果具有高度的相关性，可以用来评价和研究配体与受体的相互作用。高表达a1D受体CMC/MS-FAC联用法为配体-受体动力学的研究提供一种新的低污染、高灵敏、动态真实地反应配体-受体相互作用的方法，这对于研究配体-受体相互作用基本理论、药物在受体水平的作用和药物筛选等方面具有重要的意义。