MicroRNA-26a在他克莫司抑制局灶节段性肾小球硬化发生发展的调控机制及预后评估意义

The clinical outcome and prognosis focal segmental glomerulosclerosis (FSGS) is largely restricted by its complicated pathogenesis. microRNAs (miRNAs) have been suggested to play important roles in the pathogenesis of FSGS. In our previous study, we have found that miR-26a is down-regulated significantly in patients with FSGS; Additionally, TAC, an inhibitor of calcineum, reversed puromycin aminonucleoside (PAN)-induced miR-26 down-regulation and podocyte apoptosis, suggesting that miR-26 takes part in FSGS through CaN/NFAT signaling pathway. In this project, we will use FSGS patient samples, cell culture of podocytes, mice with podocyte-specific knockin of miR-26a and adriamycin-induced nephropathy animal model to explore the molecular mechanisms of miR-26a in the pathogenesis of FSGS and to clarify the possibility of miR-26a as a therapeutic target for FSGS. Our work will help to verify a target for FSGS treatment.

局灶节段性肾小球硬化（Focal segmental glomerulosclerosis, FSGS）发病机制的复杂性是制约其治疗及预后的关键因素。已有研究发现microRNAs与FSGS的发病密切相关。申请人前期研究发现在FSGS患者血清和外周血细胞中miR-26a的表达量显著低于正常人，并发现钙调神经磷酸酶抑制剂他克莫司可恢复由于氨基甘嘌呤霉素处理导致的miR-26a表达下降及足细胞的凋亡，表明miR-26a可能通过CaN/NFAT信号通路参与FSGS发病。本项目拟在前期研究的基础上，利用FSGS病人样本、体外足细胞培养、miR-26a基因足细胞特异敲入小鼠及FSGS阿霉素动物模型等，阐明miR-26a与FSGS发病的相关性及在FSGS发病中的作用机制并探讨miR-26a作为FSGS治疗靶点的可行性。本项目的完成有助于明确FSGS的发病机制。

局灶节段性肾小球硬化（Focal segmental glomerulosclerosis，FSGS）是肾病综合征最常见的病理类型之一，是发生终末期肾病(ESRD)的重要原因。如今针对FSGS的治疗仍是困绕全球肾脏病学者的一大难题。迄今为止，人们对于FSGS治疗的有效靶向目标还不明确。有研究表明足细胞相关基因的突变可以引起FSGS的发生。但目前越来越多的研究表明循环因子—miRNA与FSGS发生有密切关系。本研究发现FSGS患者组血清和外周血单个核细胞的miR-26a1表达量明显低于健康对照组。同时，课题组利用miR-26a1敲除小鼠，miR-26a2敲除小鼠，miR-26a1/a2双敲除小鼠， miR-26a1足细胞特异过表达小鼠以及miR-26a1/CD4+T细胞全身过表达小鼠系统阐述在FSGS发生中的作用及其分子机制。由于C57BL/6小鼠背景的阿霉素动物模型不太成功，课题组采用C57BL/6和BALB/c混合背景进行动物模型。研究结果显示miR-26a1单敲除能明显加重小鼠FSGS表型：足细胞足突融合、肌酐和尿蛋白明显增加；miR-26a2单敲除不影响小鼠FSGS表型的加重；同时足细胞过表达miR-26a1能明显抑制小鼠FSGS表型产生；CD4+T细胞过表达小鼠不能显著抑制小鼠FSGS表型产生。对对照小鼠、miR-26a1敲除小鼠和miR-26a1足细胞全身过表达小鼠足细胞进行体外分离、培养以及Puromycin aminonucleoside (PAN)处理，结果显示miR-26a1过表达能抑制PAN处理引起的足细胞凋亡增加和微丝结构重排，而miR-26a1则反之。RNA-seq结果显示miR-26a1的作用靶点是PTEN-GSK3β。另外，课题组阐述另一个miRNA (miR-874-3p)在肾间质纤维化的作用和分子机制，并且创造性制作可用于早期活体诊断急性肾损伤的近红外探针。课题组在基金的支持下共发表11篇SCI文章，其中包括在Biosensors & Bioelectronics，Human Molecular Genetcis等通讯作者文章。另外在项目实施过程中，负责人申请到一项国家自然基金面上项目。