负载分泌型miRNA集群的微粒在间充质干细胞治疗急性移植物抗宿主病中的作用及机制探讨

效应机制未明及潜在安全隐患是间充质干细胞（MSC）应用于治疗急性移植物抗宿主病（aGVHD）的瓶颈所在。新近发现，细胞间能通过释放微粒（MP）传递分泌型miRNA，高效调控靶细胞基因表达。MSC来源的MP包裹有大量miRNA分子，结合MSC作用特点及前期研究，我们推测：负载分泌型miRNA集群的MP是MSC治疗aGVHD的重要效应器。.本课题拟体外证明MSC-MP通过传递miRNA集群等机制发挥免疫抑制作用，并研究调控MP内容物组装的因素及其分子机制；构建aGVHD模型，观察阻断MP释放对MSC疗效的影响，同时探讨直接输注MSC-MP对小鼠aGVHD的治疗效应，证明MP是MSC的重要效应器。本课题的完成，将进一步阐明MSC的作用机制,并可能基于MP建立一种评判MSC体内疗效的良好指标，更为重要的是，MP有望发展为一种规避MSC隐患的新型治疗手段，为突破MSC的临床应用瓶颈提供潜在策略选择。

本课题拟通过分离、提取、鉴定间充质干细胞（MSC）来源微泡(MV)，分析MSC-MV是否具有免疫调节作用用以调控移植物抗宿主病(GVHD)。首先，我们在全骨髓贴壁法的基础上，探讨一种改良后简便而高效的人骨髓间充质干细胞培养方法；对改良方法所获得的MSC进行鉴定，并与传统全骨髓贴壁法进行比较。结果提示新的MSC分离方式在换液、消化时间方面具有明显优势，是一种新型、可靠的MSC提取方式。在此基础上，我们进一步分离、提取、鉴定了MSC-MV，结果发现尽管MSC-MV能够与T细胞结合，但对T细胞抑制作用不明显，可能不存在课题立题中原先设计的抗GVHD作用，后将立题改为MSC-MV对造血干祖细胞（HSPC）的支持作用，探讨MSC-MV能否应用于体外脐血（CB）扩增体系中提高CB中HSPC数量。我们在研究中发现，MSC-MV包含支持造血功能的小RNA（miRNA）。我们将MSC-MV加入CB体外扩增体系中，发现MSC-MV能显著提高脐血来源的单个核细胞和CD34阳性细胞数量，并提高原始祖细胞的数量，其机制是通过MSC-MV中miRNA诱导脐血造血干细胞中自我更新信号如β-catenin等上调，诱导脐血HSPC扩增，并能保持干细胞表型。以上结果提示MSC-MV具有支持造血的功能，可能成为一种新的脐血扩增手段。本课题目前已完成两篇博士论文，相关论文正撰写及发表中。