H1N1/2009流感病毒与欧洲类禽H1N1猪流感病毒重排病毒的致病与传播特性

基因重排是流感大流行毒株产生的主要方式。H1N1/2009流感病毒与欧洲类禽H1亚型猪流感病毒感染人群与猪群的事实，为病毒重排提供了可能。因此，本项目利用反向遗传操作技术，构建H1N1/2009流感病毒与欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的重排病毒。以携带有欧洲类禽猪流感病毒HA基因的重排病毒（共127种）为核心研究内容，以小鼠和豚鼠为动物模型，研究重排病毒的致病与传播能力，并解析影响其致病性与传播性的关键基因，为将来大流行流感的预警预报及政府部门快速采取应对措施提供理论参考。

在项目执行期间，以原定计划为主要研究内容，将欧洲类禽H1N1（EA H1N1）猪流感病毒与H1N1/2009 流感病毒进行猪体内的共感染实验，以小鼠和豚鼠为动物模型，研究重排病毒的致病与传播能力，并解析影响其致病性与传播性的关键基因。. 本项目的研究表明，EA H1N1猪流感病毒和H1N1/2009病毒可以在猪体内产生多种基因型的重排病毒，其中猪的下呼吸道更容易产生重排病毒，并且产生的重排病毒以携带EA HA为主要类型。H1N1/2009病毒的RNP基因在重排病毒的产生中具有调节作用。所有重排病毒均对小鼠易感，有6种重排病毒对小鼠的致病性显著增强。其中13种重排病毒都可以在豚鼠间进行传播，有5种病毒表现出高效传播能力。同时发现，这些具有高效传播力的病毒也呈现出对小鼠高毒力表型，进一步比照病毒基因序列分析发现,这些病毒具有相似的基因组合特征：都含有EA病毒的HA或者NS基因，同时也含有H1N1/2009的RNP基因。表明携带上述基因的重排病毒不仅是优势基因病毒，还表现出对哺乳动物的高毒力和高效传播力。之后我们进一步解析了EA病毒HA和NS基因增强重排流感病毒致病力的机制。EA病毒的HA基因使重排病毒获得了禽类样受体结合特性，从而提高了流感病毒在小鼠中的毒力作用，并进一步证明了 EA病毒的HA基因G222E是影响这一分子机制的关键位点。同时还发现EA病毒的NS基因提髙了病毒的RNP聚合酶活性进而影响病毒的致病性。本项目取得的成果不仅为临床上新型重排病毒的出现进行了有效预测，并为潜在大流行毒株的防控提供了重要的理论依据。. 在本项目的支持下，我们还开展了H1N1/2009病毒的产生机制的研究，发现病毒经猪体传代后其复制力、对哺乳动物的致病性以及在哺乳动物间的传播力均显著提高，证明了猪作为重要中间宿主在H1N1/2009流感病毒进化中起着关键作用。另外还进行了我国欧洲类禽H1N1流感病毒的流行病学调查研究。结果表明，2010年11月-2012年4月分离的15株H1N1病毒代表株HA基因都属于欧洲类禽H1N1病毒，内部基因片段全部位于欧洲猪类禽进化分支，无重排发生。. 本项目圆满完成了既定的研究内容，并在该基金的资助下探索了H1N1/2009病毒的产生机制及我国欧洲类禽H1N1流感病毒的流行病学调查研究，达到了项目支持的预期目的。