HGF相关的肺癌EGFR抑制剂耐药机制与调控研究

肺癌对EGFR-TKI（易瑞沙，特罗凯等）的获得性耐药是影响肺癌靶向治疗的关键难题。申请人已经报道了肝细胞生长因子（HGF）能够导致肺癌对EGFR-TKI耐药，HGF通过磷酸化其受体MET，激活PI3K/Akt通路，而不需要ErbB3的参与。进一步研究表明：HGF还可以使肺癌对不可逆性EGFR-TKI耐药；同时，HGF能够加速MET基因扩增克隆的形成。因此，HGF-MET在EGFR-TKI耐药机制中起到关键作用。上述发现提示MET抑制剂可预防和治疗HGF或MET扩增相关的EGFR-TKI耐药。本项目拟采用新一代的MET/VEGFR2抑制剂，通过体外共培养，基因转染、沉默以及小鼠肿瘤模型等技术，旨在获得MET抑制剂克服HGF或MET增殖相关EGFR-TKI耐药的可靠证据，同时探讨多靶向抑制的价值。本项目将进一步阐明EGFR-TKI耐药机制，为指导提高肺癌靶向治疗的临床效果提供科学依据。

EGFR抑制剂获得性耐药是影响EGFR突变肺癌患者疗效的严重问题。我们曾报道了肝细胞生长因子HGF通过Met/PI3K信号途径诱导肺癌对EGFR抑制剂耐药。HGF同时还被认为与VEGF协同参与血管生成过程，而VEGF也是肺癌治疗的重要靶点。因此，我们猜测同时抑制HGF和VEGF对于HGF相关EGFR抑制剂耐药可能获得更好的治疗效果。在本研究中，我们发现Met/VEGFR2双靶向抑制剂E7050通过抑制Met/Gab1/PI3K/Akt通路克服了EGFR抑制剂耐药。HGF通过激活Met/Gab1通路刺激EGFR突变肺癌细胞分泌VEGF水平增加。而E7050可抑制这一作用。在小鼠移植瘤模型中，HGF转染的Ma-1细胞比空转Ma-1细胞肿瘤表现出了对吉非替尼的耐药性以及更多的微血管生成。E7050单药抑制了血管生成并延缓了Ma-1/HGF肿瘤生长。而E7050联合吉非替尼治疗明显缩小了小鼠肿瘤。另一方面，联合HGF和VEGF的中和性抗体同样导致了肿瘤的明显缩小。这些结果提示双靶向HGF-Met和VEGF-VEGFR2是一种新的克服HGF相关EGFR-TKI耐药肺癌的新治疗策略。另一方面，对于EGFR野型的肺癌患者，虽然一线治疗首选化疗，但化疗失败后EGFR-TKI也是治疗选择之一。我们发现，对于EGFR野型的A549与H358细胞，EGFR-TKI吉非替尼和厄洛替尼仍有一定的治疗作用。但HGF降低了上述细胞的敏感性。当联合MET抑制剂或HGF抗体后敏感性可恢复。同时，我们发现对于EGFR野型肺癌细胞，PI3K抑制剂或MEK抑制剂均可降低细胞增殖，而只有PI3K抑制剂可降低EGFR突变肺癌细胞的增殖。证明对于野型细胞的增殖，PI3K/Akt和MAPK通路均有重要作用。上述内容发表于Am J pathol以及Oncotarget（已接收，待发表)。除上述发现外，我们在靶向治疗联合放疗的机制上也进行了探讨，发现PTEN/PI3K/Akt通路直接影响肿瘤的放疗敏感性，证实了PI3K/mTOR以及MET抑制剂的放疗增敏作用。也发现了miR-20通过调节PTEN从而影响PI3K/Akt通路活性进而影响放疗敏感性的机制。分别发表于Mol Canc Ther, Int J Radiat Oncol Biol Phys和BBRC。