HGF诱导NSCLC细胞对EGFR-TKIs耐药机制的研究。

目前，EGFR-TKIs（有吉非替尼和厄洛替尼两种）成为治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的重要手段，但存在原发和继发耐药，与EGFR基因类型有很大关系，总有效率只有20%。最近，申请人首次应用HGF诱导EGFR不同基因型NSCLC细胞对吉非替尼耐药，证实耐药机制与C-MET磷酸化有关。C-MET、EGFR及其下游通道在HGF诱导NSCLC对EGFR-TKIs耐药中的变化不清楚。我们拟选择EGFR突变型、野生型两株细胞，用HGF、EGFR-TKIs及c-Met抑制剂或HGF拮抗剂处理，检测EGFR、MET及下游通道主要蛋白表达，从体内、体外实验证实HGF/c-Met系统是NSCLC对TGFR-TKIs耐药的一个重要途径，为临床提供EGFR-TKIs联合c-Met抑制剂或HGF拮抗剂有效治疗对EGFR-TKIs耐药NSCLC的依据，并为EGFR不同基因型NSCLC个体化靶向治疗提供实验依据。

近年来EGFR-TKI逐渐成为治疗NSCLC的重要手段。EGFR突变与EGFR-TKI有效率有很大相关性，非选择的NSCLC患者有效率只有20%，存在原发或继发性耐药。EGFR-TKI主要有吉非替尼和厄洛替尼。HGF是一种由间质细胞分泌的多功能因子。我们前期工作HGF诱导NSCLC细胞对吉非替尼耐药。C-MET、EGFR及其下游通道在HGF诱导不同基因型NSCLC对EGFR-TKIs耐药中的变化不清楚。本研究选择不同EGFR基因型NSCLC细胞（突变型、野生型），用HGF诱导细胞对EGFR-TKI耐药，检测细胞增殖、凋亡,检测干扰c-Met前后EGFR、MET及下游通道蛋白，应用c-Met抑制剂研究逆转HGF诱导NSCLC细胞对EGFR-TKI耐药及机制，并建立裸鼠移植瘤，观察肿瘤生长，检测组织中c-Met及其下游通道蛋白，体内外证实HGF/c-Met系统是不同基因型NSCLC对EGFR-TKI耐药的重要途径。结果：EGFR-TKI对NSCL细胞生长抑制作用呈浓度依赖性，HGF诱导后EGFR-TKI抑制细胞的生长曲线往右移。EGFR-TKI作用下，HGF仍可刺激NSCLC细胞中c-Met及下游通道磷酸化蛋白表达。干扰细胞内c-Met后，HGF不能提高细胞存活率，不能活化c-Met及下游通道蛋白。不同浓度EGFR-TKIs联合SU11274作用于HGF诱导细胞时NSCLC细胞存活率比EGFR-TKI单独作用于HGF诱导细胞时明显降低；HGS（HES）组的细胞凋亡比HG（HE）组明显增加；HGS（HES）组的c-Met及下游通道活化蛋白量比HG（HE）组明显减少。动物实验MRC-5细胞和PC9、H292细胞混合接种时，其分泌的HGF能够降低EGFR-TKI对肿瘤生长的抑制作用,且激活c-Met及其下游通道蛋白。EGFR-TKI联合SU11274用于裸鼠移植瘤模型抑制HGF诱导的移植瘤的生长，抑制HGF激活的c-Met及其下游通道蛋白的激活。结论：在体内外HGF可诱导不同基因型NSCLC细胞对EGFR-TKIs耐药，c-Met及下游信号通道激活是诱导对EGFR-TKI耐药的重要机制，c-Met抑制剂可逆转HGF诱导的EGFR耐药，机制与抑制HGF活化的c-Met及下游通道蛋白有关。证实了HGF/c-Met系统可作为治疗EGFR-TKI耐药的不同基因型NSCLC的靶向位点。