水泡性口炎病毒基质蛋白（M）对猪天然免疫应答的抑制作用研究

Pig, cattle are natural hosts of vesicular stomatitis virus (VSV). However, the existing data regarding pathogenic mechanisms by VSV in pig or cattle were few, and mostly were from mice, which is not the natural host of VSV. Successful evasion of host immune responses may be the reason for pathogenesis of VSV in swine. Matrix protein (M) is the critical virulent factor of VSV, which is also the only protein involved in interference of innate immunities in mice. Dendritic cells belong to those targeted by viruses to interfere with host innate immunities, whereas swine oral mucosal cells are the target cells infected by VSV. Due to the above reasons, our project will be focused on both types of the swine cells to study the significance of M protein in interfering with swine innate immunities, and determine the targeted protein interacted with M. The aim of the project lies in uncovering the pathogenic mechanisms of VSV, which can also do helps to the development of novel vaccines against VSV.

水泡性口炎病毒（VSV）的宿主是猪、牛等重要家畜，目前对其致病机制的研究结果大多来源于非宿主动物小鼠，本体动物却了解很少，病毒有效逃避宿主免疫应答可能是导致VSV致病性的一个重要原因。基质蛋白（M）是VSV重要的毒力因子，也是VSV五个蛋白中唯一已知可干扰小鼠天然免疫应答的蛋白。树突状（DC）细胞是病毒干扰宿主天然免疫的重要靶细胞；猪口腔粘膜上皮细胞则是VSV感染靶细胞之一,由于天然免疫是宿主抵抗病毒感染关键的第一道防线，本项目拟以这两种相关细胞为主要研究对象，探讨Ｍ蛋白对猪天然免疫应答的抑制作用，并寻找与之互作的猪相关蛋白，旨在为揭示VSV的致病机理以及研制新型疫苗提供理论和实践依据。

水泡性口炎是一种危害畜牧业生产的传染性疾病，由水泡性口炎病毒（VSV）引起，该病毒的天然宿主为猪、牛等重要家畜动物，目前还无有效的疫苗予以应对。基质蛋白(M)是VSV重要结构蛋白之一，但其对病毒在猪体内致病性的影响以及作用机制仍不明确，本项目利用反式遗传技术构建了基质蛋白（M）不同位点发生突变的VSV变异毒株，通过对野生型-突变型病毒的体内、外感染及致病性比较研究，旨在揭示M蛋白的功能及对致病性的意义，实验结果表明: ①M蛋白是决定VSV在猪致病性的重要毒力因子，②M蛋白通过抑制宿主细胞mRNA的转录来抑制I型干扰素信号途径，从而使得病毒得以宿主细胞内大量复制。研究的重要成果之一是揭示了M蛋白的第51位甲硫氨酸、第221位缬氨酸和第226位丝氨酸均与VSV的致病性有关，基于此发现, 我们首次成功制备了一株51、221和226 三氨基酸位点共同突变的重组VSV（VSVMT），该病毒株在猪体内高度弱化，但仍具有很好的免疫原性,可激发动物产生强有力的免疫保护力，因此,综合安全性和有效性两方面的评估, VSVMT可成为预防水泡性口炎的良好减毒疫苗, 另一方面, 借助重组DNA技术，VSVMT基因组中克隆了一个可表达外源蛋白的多克隆位点，使得该病毒可成为有应用前景的疫苗载体。