从肠道微生态失衡导致Th/Treg平衡改变探讨清热活血法治疗活动期类风湿关节炎的分子机制

Qingre Huoxue Decoction(QRHXD) is an empiric therapy of the famous TCM doctor for treating RA. It has been proved having a reliable clinical effect by relieving pain, shortening morning stiffness time and prolonging bone destruction. Previous researches showed that QRHXD could inhibit synovitis, angiogenesis and bone erosion through modulating expressions of inflammatory cytokines and angiogenic factors. The latest study showed that RA represents a state of chronic inflammation that might be provoked or aggravated by the overgrowth of pathogenic bacteria or a lack of immune-modulating commensal bacteria, which could be treated by DMARDs. Based on above, we speculate that one of the possible mechanisms of QRHXD on treating RA is regulating dysbiosis of intestinal microecology to balance Th/Treg immunity and inhibit the expression of pro-inflammatory cytokines. In this project, we combine human and animal models to explore the treating mechanism of QRHXD from body-cell-molecule stages by advanced methods such as Metagenomics, PCR-DGGE, Western blot, micro-CT, etc. , which is of great significance to inherit the famous TCM doctor's experience, reveal its scientific connotation, and provide new ideas for treating RA as well.

清热活血方是名医路志正教授治疗活动期类风湿关节炎(RA)的经验方，临床疗效肯定，可改善患者关节肿痛、缩短晨僵时间、延缓骨破坏。前期研究表明，该方通过调控炎性因子和血管生成相关因子的表达，发挥抑制滑膜炎症、血管新生和骨破坏的作用。RA病因学最新研究发现肠道致病菌的过度生长和免疫调节性共生菌的缺乏可能导致关节慢性炎症的发生，且DMARDs治疗可改善肠道菌群失衡。由此推测，清热活血法疗效的可能机制之一是通过调控肠道微生态失衡，调节Th/Treg平衡及炎症因子表达，发挥治疗活动期RA的效果。本研究拟采用宏基因组测序与分析、PCR-DGGE分析、Western blot、micro-CT等前沿技术，人体试验与动物实验相结合，从整体-细胞-分子层面验证假说的客观性，以调节肠道微生态和免疫平衡角度揭示清热活血法治疗活动期RA的分子机制，对传承和挖掘名老中医经验、阐释其理论的科学内涵和RA防治提供新思路。

类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是以关节滑膜慢性炎症为主要表现的自身免疫性疾病，其病理特点为多种炎症细胞浸润、血管翳形成和滑膜增生，最终导致骨质破坏、关节畸形和残毁。现代医学认为RA发病受基因与内外环境因素共同影响，肠道微生态环境与宿主的生长、发育及物质代谢关系密切，影响机体免疫应答功能，近年来其与 RA 发病关系研究颇受重视。我院以清热活血法治疗活动期RA在临床和基础研究均有深厚积累，在此基础上本课题以肠道微生物为切入点，对清热活血法治疗活动期RA的分子免疫机制进行深入研究。.本课题采用16s rDNA测序与分析、PCR-DGGE分析、ELISA、流式细胞术等等方法，临床试验与动物实验相结合，观察清热活血法治疗活动期RA的疗效，对肠道菌群的影响和对T细胞平衡的调节。课题组按预期完成实验内容，统计分析数据，得出相应的结论，较好的完成该课题的研究。.结果显示，1）清热活血方可有效缓解CIA大鼠关节肿胀度，减小临床积分，抑制滑膜炎症和关节破坏，降低关节CD31和VEGF表达，减少血管新生数量；2）清热活血方可增加CIA大鼠肠道菌群丰度、种类、均匀度，减小差异度，促进菌群种属失衡状态趋向正常大鼠肠道菌群，其中CIA大鼠主要失调菌群为乳杆菌，活动期RA患者主要失调菌群为Firmicutes（厚壁菌门）、Bacteroidetes（拟杆菌门）；3）清热活血方可有效改善活动期RA患者的ESR、RF、CCP、DAS28等临床疗效指标；4）清热活血方可上调CIA大鼠脾脏Treg细胞水平比例，下调Th17细胞水平比例，通过上调IL-10、下调IL-17表达，维持Th/Treg稳态，调节机体免疫免疫。.本课题研究发现清热活血方治疗活动期 RA 可能通过调控肠道致病菌的过度生长和免疫调节性共生菌的缺乏，恢复肠道微生态平衡，发挥调节免疫紊乱的作用，从而抑制 RA 的进展。以上结论揭示了清热活血法治疗活动期 RA疗效发挥的科学内涵，丰富和完善了名老中医治疗 RA 的中医理论。