糖皮质激素治疗感冒后嗅觉障碍的机制研究：减轻神经炎症和调节嗅干细胞活性

Postviral olfactory dysfunction (PVOD) is one of the most common olfactory dysfunction. The pathophysiologic mechanism is not clear, and there is no effective treatment with poor outcome of olfactory function. Our previous clinical studies have found the efficacy of glucocorticoids (GC) in the treatment of patients with PVOD. The mechanism of GC for the treatment of PVOD is unknown. We propose the following hypothesis: GC plays a key role in the treatment of PVOD by inhibiting the neuroinflammation of the olfactory nerve system and boosting the vitality of olfactory stem cells. Present study will establish mice animal model of PVOD, and methylprednisolone will be administered. The measurements will be achieved including behavior olfactory function testing (buried food pellet test), olfactory nerve pathology (olfactory stem cells, olfactory epithelium, olfactory bulb and piriform cortex), inflammation related enzymes (iNOS, iCOX-2 and cPLA2), inflammation related cytokines (IL-1 beta and TNF alpha), an important inflammatory signal pathway of p38MAPK and apoptosis related channel of Bax/Bcl-2 expression after treatment at different days (1D, 3D, 1W, 2W, 4W, 8W, 12W).Once our hypothesis has been verified，It will be helpful to clarify the pathogenesis of PVOD as well as to establish a novel therapeutic method in the treatment of PVOD.

病毒感染后嗅觉障碍是最常见的嗅觉障碍之一。其机制不明确，而且无有效治疗方法，嗅觉预后不好。我们前期的临床研究发现使用糖皮质激素能有效治疗病毒感染后嗅觉障碍。糖皮质激素治疗病毒感染后嗅觉障碍的机制不明了。我们提出如下假说：糖皮质激素通过抑制病毒感染导致的神经炎症发挥治疗作用。本研究通过建立病毒感染后嗅觉障碍小鼠动物模型，行甲泼尼松龙治疗，观察治疗后不同节点的嗅觉功能（埋藏食物小球试验）、嗅神经病理（嗅干细胞、嗅上皮、嗅球和梨状皮质），炎症相关酶（iNOS、iCOX-2和cPLA2）, 炎症相关细胞因子(IL-1β、TNF-α)，重要的炎症信号通道p38MAPK和凋亡相关通道Bax/Bcl-2的表达。一旦我们的假说得到验证，将对阐明该病的发病机制和建立新的治疗方法起到巨大的推动作用。

本课题探讨了病毒感染后嗅觉障碍（PVOD）的发病机制，主要探究病毒经鼻感染后是否会累及嗅上皮以上(如嗅球或大脑皮层)的嗅觉通路。并探讨糖皮质激素治疗PVOD的可能机制。.课题首先进行了流感病毒感染后嗅觉障碍小鼠模型的构建。本部分首先确定病毒的半数致死量，研究选用甲型流感病毒A/California/07/2009(H1N1 CA07)毒株进行病毒扩增，经空斑法测增殖后的病毒滴度，接着计算不同浓度病毒感染后小鼠死亡率从而获得病毒半数致死量这一重要实验参数。第二部分为小鼠模型的构建，用甲型流感病毒H1N1 CA07经鼻滴注BALB/C小鼠，检测小鼠模型的嗅上皮、嗅球和脑中是否有流感病毒RNA，接着采用通用的小鼠行为学测试（食物埋藏实验）测试小鼠是否出现嗅觉障碍，得到流感病毒感染后致嗅觉障碍小鼠模型。研究的第三部分为流感病毒致嗅觉障碍的发病机制的研究，本部分应用RNAscope、H&E染色以及多色免疫荧光染色技术检测流感病毒损伤嗅觉通路的部位、损伤的类型及免疫炎性类型等，最后利用转录组学技术获取与感染和致病相关的宿主调控分子，揭示流感病毒在嗅觉障碍中的致病机制。第四部分为糖皮质激素干预实验。PVOD模型小鼠随机分为实验组和对照组，实验组给予糖皮质激素甲基泼尼松龙干预，腹腔注射，剂量1mg/kg，每天一次。对照予以生理盐水注射。观察糖皮质激素对PVOD的疗效和炎症指标的变化情况。.本课题经以上研究得到了H1N1 CA07病毒经鼻接种后后嗅觉障碍小鼠的动物模型。并在动物模型的后续研究流感病毒主要局限在嗅上皮层面，此研究结果提示嗅上皮通常能抵御H1N1 CA07病毒株深入到嗅觉通路的嗅球等更高层面，此外，在小鼠嗅球和脑内检测到少量病毒RNA也提示病毒通过嗅觉通路进入脑内也是一种可能的机制。糖皮质激素干预后能改善PVOD小鼠嗅觉功能，其机制可能是通过抑制炎症反应。