Ang-(1-7)受体Mas调节肝星状细胞在原发性肝细胞癌增殖转移中的作用及机制研究

In order to reveal the role and mechanism of Ang-(1-7) receptor Mas affecting the hepotocellular carcinoma development through inhibiting activated hepatic stellate cells, firstly, this reseach will apply immunohistochemistry, real time RT-PCR and immunofluorescence methods to study the expression of Mas and α-SMA in liver cancer tissues. Secondly, the cellular changes by co-culture of Mas-overexpression or Mas-knock down LX-2 cell with hepotocellular carcinoma cell line and function of co-culture cells in tumor formation using nude mice expriment and metastasis in vivo expriment were observed. Finally, the assay of chemokine chip was used to screen the different chemokines which were confiemed by real-time RT-PCR. Furthermore, the signal pathway was deduced. All these results will provide theoretical basis for further studing the exact mechanism of Mas in the microenviroment of hepatocarcinoma and exploring possibility of Mas as therapeutic target.

为了揭示Ang-(1-7)受体Mas通过抑制活化的肝星状细胞影响肝癌的发生发展的作用及机制，本研究应用免疫组化，real-time RT-PCR等方法研究Mas和α-SMA在肝癌组织的表达，通过构建沉默及过表达Mas的肝星状细胞LX-2，并将其与肝癌细胞共培养观察所引起的细胞生物学改变，以及运用荷瘤裸鼠实验及体内转移实验观察共培养细胞在肿瘤形成中的作用。最后利用基因芯片技术检测沉默或高表达mas的LX-2细胞所引起的趋化因子表达的差异,并使用Real-time RT-PCR技术筛选出关键的趋化因子，推测其可能的信号通路，为今后研究Mas在肝癌微环境的精确作用机制，探讨Mas作为肝癌的治疗靶点提供理论依据。

原发性肝癌起源于肝细胞或肝内胆管上皮细胞，是全球最严重的恶性肿瘤之一，其中90%为肝细胞性肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC），由于高度的复发率和转移率，肝癌患者的五年生存率较低，肝癌的复发和转移仍然是肝癌治疗的两大难题。近年来，化疗，放疗，手术和生物化学治疗等治疗手段得到了大幅度提高，但与肝癌相关的死亡率仍然令人沮丧，因此，开发治疗肝癌的其他治疗靶点势在必行。肾素-血管紧张系统（renin-angiotensin system, RAS）是由一系列肽类激素及相应酶所组成的体液调节系统，主要功能是调节血压，类固醇的合成和释放，水、电解质的平衡，维持人体内环境的相对稳定。近来的研究发现，组织还可通过自分泌，旁分泌和胞分泌产生局部肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system，ＲAS) ，调节长期的生物学过程如细胞生长和增殖，与癌症的发生和转移密切相关，现有研究结果提示ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴可能是一潜在的肿瘤治疗靶点。为了揭示Ang(1-7)受体Mas在肝癌细胞与肝星状细胞中的作用及机制，本研究应用免疫组化，real-time RT-PCR等方法研究Mas和α-SMA在肝癌组织的表达，发现α-SMA在肝细胞癌癌组织中阳性表达强度高于癌旁组织，差异具有统计学意义（P ＜0.05），Mas在肝细胞癌癌旁组织中阳性表达强度高于癌组织,差异具有统计学意义。通过细胞增殖、周期、凋亡， Transwell迁移侵袭实验、软琼脂集落形成等实验发现肝星状细胞具有促进肝癌细胞Huh-7细胞增殖、迁移和侵袭的能力。Mas作用于肝星状细胞，减弱其促进肝癌细胞Huh-7细胞增殖、迁移和侵袭的能力。过表达Mas对肝癌细胞Huh7和Hep3B的增殖、侵袭、迁移、克隆形成能力均有抑制作用，对细胞凋亡能力有促进作用，有望作为肝癌的治疗靶点。