ANKRD18B基因在肺癌发生过程中的调控及功能的初步研究

我们前期通过全基因组甲基化分析，筛选出一个在肺癌发生过程中的高甲基化片段，通过生物信息学分析，该片段位于ANKRD18B基因外显子1和2。进一步分析揭示该基因在肺癌及一些不同组织来源的肿瘤细胞中均发生高甲基化。通过DNA甲基化酶抑制剂去甲基化实验证实ANKRD18B高甲基化与其mRNA表达下调相关，表明该基因在肺癌发生中具有重要作用。经文献检索，未见关于该基因的调控和功能研究的报道。为此，本项目拟进一步分析该基因在肺癌发生发展过程中的甲基化动态变化，结合DNA突变、杂合性缺失分析，初步确定其在肿瘤发生过程中DNA水平的调控模式。同时，从细胞生长/凋亡、细胞周期、细胞迁移、恶性转化等方面入手，分析该基因的主要功能，为进一步全面研究该基因在蛋白质相互作用、生长发育、疾病发生等方面的作用奠定基础。

本项目在前期发现ANKRD18B是肺癌发生中一个新的甲基化基因的基础上，利用MSP、PCR分析等分子生物学实验方法，对该基因在肺癌发生发展过程中的甲基化变化，基因功能等进行了分析。结果发现53.1%（52/98）肿瘤组织中该基因高甲基化，而10例正常组织中均未检测到高甲基化。进一步对病理资料完整的62例肿瘤组织ANKRD18B基因甲基化与临床病理关系进行分析发现，肿瘤细胞分化程度越低，该基因甲基化发生率越高（p=0.09）。在来源于肺癌病人的痰液标本和血浆标本中，36.9% (24/65)血浆标本和38.8% (33/85)的痰标本中能够检测出该基因的高甲基化。在62例配对肿瘤组织、血浆和痰标本中，33例ANKRD18B基因甲基化肿瘤组织病人中，72.7%（24/32）的病人血浆 和69.7%（23/32）病人痰标本中能够检测出该基因的高甲基化，表明该基因高甲基化可以作为肺癌病人诊断的候选标志物。利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术结合DNA测序，获得其cDNA全长并上传Genbank（accession number KC955137）。在此基础上，进一步分析发现ANKRD18B基因甲基化明显抑制其表达，而且在肺癌发生过程中该基因主要通过DNA甲基化调控而失活。通过构建ANKRD18B高表达细胞模型，发现该基因能明显抑制肿瘤细胞生长，其机制主要是通过诱导细胞凋亡，相关的研究表明该基因是一个潜在的抑癌基因。