阳虚质膝骨性关节炎Wnt/β-catenin信号通路水平及调体干预研究

Constitution plays an important role in the formation, development and outcome of disease. To this end, we pre explore Northwest knee osteoarthritis in Constitution of TCM distribution characteristics. Investigation of the region analysis of knee osteoarthritis on the basis of the high incidence of Yang deficiency constitution.Exploring the relationship between the Yang deficiency constitution of knee osteoarthritis and the Wnt/β-catenin signaling pathway regulates the level from the molecular level.Exploring the pathogenesis of the yang quality of knee osteoarthritis patients.Adjusting the constitution therapy and efficacy evaluation of patients with Yang deficiency constitution to YouguiWan. Detection and analysis of Wnt /β-catenin signaling pathway regulates the level of change before and after treatment and to detect patients, and further demonstrate the relationship between constitution and signaling pathways. Providing an objective basis for the Yang deficiency constitution of Discrimination,and Providing a reference by other constitution objective indicators of Discrimination. Providing a new theoretical basis for differentiating style control of Chinese medicine, ideas, and therapeutic targets.

中医体质因素在疾病的形成、发展以及转归中起着重要作用。为此，我们前期采用流行病学调查的方法探讨了西北地区膝骨性关节炎的中医体质分布特点。本项目拟在调查分析该地区膝骨性关节炎高发体质为阳虚质的基础上，应用免疫组化和RT-PCR检测方法从分子水平探讨膝骨性关节炎阳虚质与Wnt/β-catenin信号通路调节水平间的关系；以右归丸对阳虚质患者进行调体干预和疗效评价，并检测分析调体干预前后Wnt/β-catenin信号通路调节水平的变化，深入探讨西北地区阳虚质膝骨性关节炎患者的发病机理。为阳虚质的辨析提供客观依据，为通过客观指标辨析其他体质提供参考，为中医药辨体防治该病提供新的思路和治疗靶点。

目的：探讨KOA中医体质类型分布特点及相关发病因素，确定KOA高发体质类型，并从分子水平探讨KOA阳虚质与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法：2013年4月至2016年12月，对甘肃省中医院245例KOA患者进行问卷调查，同期随机选取128例非血缘关系健康志愿者为对照组。主要观察指标包括年龄、性别、民族、体重指数、发病年龄、中医体质、KOA相关基因多态性（COL2A1、VDR、LRP5基因多态性）及KOA相关蛋白表达（IL-1β、IGF-1、TNF-a、TGF-β1）。检测阳虚质KOA关节软骨中蛋白激酶C、β-连环蛋白、基质金属酶13的表达差异。结果：1.KOA中医体质病例对照研究（1）KOA患者245例，其中男性32例，女性213例；健康志愿者128例，其中男性71例，女性57例；（2）病例组中城市与农村患者初次疼痛年龄差异有统计学意义，男女体重指数、女性初潮年龄、绝经年龄、职业分类、工作环境、文化程度构成差异有统计学意义；（3）病例组与对照组LRP5基因rs3736228位点、VDR基因TaqI位点多态性比较无明显差异；（4）COL2A1基因rs2276454位点T等位基因是OR:1.934;95%CI:1.594–2.349，P=0.035；（5）与正常对照组相比，气虚质、阳虚质IL-1β、TNF-a的表达水平升高，气虚质IGF-1、TGF-β1的表达水平降低，其差异有统计学意义。2.阳虚质KOA患者Wnt/β-catenin及其相关基因表达的研究（1）PKC、MMP-13在各组中均有表达，表达主要位于细胞浆及细胞核内，组间进行两两比较，均具有明显差异；β-catenin在正常对照组关节软骨中表达为阴性，在阳虚质KOA组与非阳虚质KOA组均有表达，表达主要位于细胞核内，病例组两者比较，无明显差异。（2）RT-PCR研究显示：PKC、MMP-13基因在阳虚质病例组、非阳虚质病例组与对照组进行两两比较，差异均有统计学意义。β-catenin基因在正常对照组中无明显表达，与KOA病例组关节软骨组织中的表达进行比较，具有明显差异。结论：年龄、性别、体重指数、中医体质、COL2A1基因多态性、IL-1β、IGF-1、TNF-a、TGF-β1、PKC、β-catenin、MMP-13与KOA的发病相关，且可能PKC、MP-13与阳虚质高发KOA有密切相关性。