TIP30核内化的分子机制及其与EGFR信号通路的相关性研究

TIP30 is a tumor suppressor which can regulate cell proliferation and apoptosis through several mechanisms in the nuclear or plasma of cells. We have found that TIP30 knockdown can prolong the activity of EGFR downstream signaling through down-regulate EGFR endocytosis and degradation, and increase EGFR nuclear localization.Our previous data also has shown that EGF treatment can induce TIP30 nuclear localization. However, how EGF treatment can induce TIP30 nuclear localization,and the corelation of TIP30 with EGFR nuclear signaling is still unknown. In addition, how TIP30 can transport through nuclear membrane to nuclear is also not clear. In this study, we aim at exploring why EGFR signaling pathway can regulate TIP30 nuclear localization , and how TTP30 can transport through nuclear membrane by using IP, CHIP and Confocal-microscopy. Moreover, we also want to further clarify whether TIP30 could?be as a predictive marker for EGFR-targeted therapy in human lung adenocarcinoma.

TIP30基因是与肿瘤密切相关的抑癌基因。TIP30蛋白可分布在细胞核、核膜和胞浆内，通过多个环节调节细胞生长和凋亡。我们以往的研究已证明TIP30可通过调节EGFR的胞浆内转运、降解和核内化，抑制EGFR信号通路激活。最近我们又发现EGF可诱导TIP30核内化，但TIP30如何在细胞内不同部位转运、如何跨核膜转运、EGF如何诱导TIP30核内化、核内的TIP30是否参与EGFR核内信号的负反馈调节等目前还不清楚。本项目拟用免疫共沉淀、染色体免疫共沉淀、激光共聚焦等方法，探索EGFR信号通路如何调节TIP30核内化、TIP30如何通过核膜、核内的TIP30对EGFR核内信号的调节作用及TIP30是否与靶向EGFR药物的敏感性相关等问题。初步阐明TIP30细胞内转运的分子机理，进一步了解TIP30的生理功能和相关调节机制，并探索TIP30作为靶向EGFR药物的新的疗效预测指标的可能性。

TIP30基因是与肿瘤密切相关的抑癌基因。TIP30蛋白可分布在细胞核、核膜和胞浆内，通过多个环节调节细胞生长和凋亡。我们以往的研究已证明TIP30可通过调节EGFR的胞浆内转运、降解和核内化，抑制EGFR信号通路激活。最近我们又发现EGF可诱导TIP30核内化，但TIP30如何在细胞内不同部位转运、如何跨核膜转运、EGF如何诱导TIP30核内化、核内的TIP30是否参与EGFR核内信号的负反馈调节等目前还不清楚。本项目研究中，我们应用免疫共沉淀、染色体免疫共沉淀、激光共聚焦等方法，发现EGFR信号通路激活可促进TIP30核内化，TIP30在肺癌细胞中与ACSL4、Endophilin B1 形成复合物，调节EGFR 早起内涵体阶段的分选；TIP30参与EGFR 在高尔基体与内质网之间的运输，进而抑制EGFR 细胞核内化，而JAK/STAT信号通路不影响TIP30核内化。TIP30可能是通过激活ERK和/或PI3K-AKT-mTOR信号通路进而调节TIP30核内化，TIP30可与核转运蛋白importin B形成复合体通过核膜。核内TIP30通过间接作用调控转录因子EGFR与CCND1启动子区DNA结合，TIP30通过与HDAC1在细胞核内形成转录复合物，抑制EGF诱导的CCND1的转录。TIP30基因抑制可诱导cyclin D1蛋白和mRNA表达增加，缩短细胞周期，促进肺腺癌细胞生长。在肺腺癌患者组织标本的研究中，我们还发现核内化的TIP30与核内化的EGFR、cyclin D1表达具有负相关关系, 即TIP30的表达下调往往伴随着cyclin D1的表达增加。项目的完成进一步了解了TIP30调节细胞生长的相关机制，为未来应用TIP30表达水平预测肺癌预后和靶向治疗疗效提供了理论依据。