可溶性重组人白介素23受体-Fc融合蛋白靶向p19治疗自身免疫性疾病的基础研究

Th17 cells, a third subset of CD4+ T effector cells in addition to Th1, Th2, emerge as a hot topic in immunology, and play an important role in autoimmune diseases. IL-23 plays a critical role in maintaining and stabilizing Th17 cells phenotype. The absence of IL-23 can significantly down-regulate the level of Th17 cells, and also can reduce the incidence of EAE. In our project, we constructed a Fc fusion protein with IL23Rp19 subunit to prolong fusion proteins' half-life, we have always analyzed the function of rhIL-23R/Fc with inhibiting Th17 cells polarized in vitro，Furthermore, we want to obtain the pharmacological data of the role of rhIL-23/Fc fusion protein in EAE model，which can indicate the mechanism of rhIL23R/Fc fusion protein in autoimmune disease in mice model, and provide new therapy evidence for autoimmune diseases like psoriasis, multiple sclerosis, Crohn's disease and so on.

Th17被认为是除Th1、Th2之外的第三类效应T细胞，和自身免疫病的发病密切相关，是当今免疫学研究的热点之一。IL-23是Th17细胞分化发育和功能维持过程中的重要因子。IL-23的缺失会显著降低Th17细胞生成，同时可降低模型鼠自身免疫性疾病的发生率、减轻其发病的严重程度。本课题选择IL23p19亚基受体蛋白IL23R为靶分子, 通过基因工程手段，真核转染成功表达融合蛋白rhIL-23R/Fc，通过预实验验证了重组hIL-23R/Fc融合蛋白体外阻止活性异常增高的Th17细胞发育的效能，本课题将进一步利用实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）动物模型，静脉输入融合蛋白rhIL-23R/Fc，观察融合蛋白体内实验的药理学指标，确定治疗自身免疫性疾病模型鼠的效果及分子机制，为银屑病、多发性硬化症、Crohn's病等多种临床免疫性疾病治疗提供重要的实验依据。

【摘要】针对IL-23与其受体IL23R的作用，设计并制备了系列高纯度新型全人源IL23拮抗分子，经活性筛选获得了分子结构全新、效果最优的新型蛋白分子rhIL23R-CHR/Fc。rhIL23R-CHR/Fc是通过同源建模与分子对接设计，经过活性筛选确定得到的优势序列，是拮抗人细胞因子IL-23的有效功能区，同时建立高表达rhIL23R-CHR/Fc细胞系扩大培养，完成N端测序、C端测序、氨基酸组成分析、等电点、分子量、圆二色谱结构等鉴定，且实验结果与预期一致；在已完成的Th17细胞分化平台基础上，rhIL23R-CHR/Fc蛋白对Th17细胞分化明显的抑制，抑制效率达83%，同时 IL-17A，IL-22，IL-17F和IL-10的表达水平明显下降；通过建立多发性硬化症和类风湿性关节炎的动物模型，发现rhIL23R-CHR/Fc可有效缓解EAE模型和CIA模型鼠的临床症状，治疗组发病率从模型组80%下降到20%，且发病时间推迟明显，改善EAE模型的中枢神经的炎性浸润和脱髓鞘情况，显著降低CIA模型的关节肿胀，流式细胞仪、Q-PCR及Western blot进一步研究显示rhIL23R-CHR/Fc通过阻断IL-23/RORγt特异性信号通路，抑制体内Th17细胞分化，降低下游炎性因子的表达，从而有改善EAE和CIA两种模型的病程，为银屑病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮病等多种临床免疫性疾病治疗提供一个可行性思路。