候选肝细胞肝癌相关基因VEPH1的功能研究

寻找肝癌新的易感基因是相关研究领域热点，单核苷酸多态性（SNP）是多基因遗传性相关疾病包括肿瘤的易感标记。课题组前期应用高通量基因芯片，对肝癌患者进行全基因扫描，发现rs2120243 SNP位点在肝癌组和对照组差异明显，并经扩大样本验证证实。该位点位于VEPH1基因的第四内含子区域，应用实时RT－PCR和免疫组化发现VEPH1基因在肝癌组织中表达明显低于癌旁组织，提示其可能是一个与肝癌发生有关新的抑癌基因。本课题拟在此基础上，进一步研究VEPH1基因表达和肝癌发生、发展及与预后的关系；同时研究肝癌细胞株过表达和抑制表达VEPH1基因后，其生物学特征的改变（细胞增殖和凋亡，克隆形成、迁移和裸鼠体内成瘤等），以及通过酵母双杂交、免疫共沉淀研究其相互作用蛋白。希望能初步明确VEPH1基因在肝癌发生、发展中的临床意义和潜在功能，及其作用机制；明确是否具有对WEPH1基因进行进一步深入研究的价值。

肝细胞肝癌（简称肝癌）位居世界范围内恶性肿瘤发病率的第四位，死亡率的第二位。肝癌的发生发展是一个多因素的复杂生物学过程。大量流行病学研究证实乙型、丙型肝炎病毒慢性感染、摄入黄曲霉素、饮酒、吸烟等是其主要危险因素。尽管在同等暴露条件下，但只有部分人群发生肝癌，提示遗传背景在肝癌的发生中起重要作用。单核苷酸多态性(SNP)是人类最常见的遗传多态性,是目前公认的第3代分子遗传标记。Illumina公司构建的SNP基因芯片发现，在肝癌中差异最明显的SNP位点是rs2120243，位于VEPH1基因第四内含子序列。VEPH1蛋白N端具有特征性的PH结构域，猜测该蛋白可能与细胞骨架形成、胞内物质运输和定位相关，但目前尚无明确结论。本课题研究发现，肝癌组织中VEPH1的表达下调与肿瘤恶性临床病理特征及不良预后显著相关，并且是肿瘤预后的独立危险因素；VEPH1基因在肝癌细胞株HCCLM3和Huh7过表达后，在体外实验中能显著抑制其增殖、迁移和侵袭的能力，在体内实验中能抑制其在裸鼠体内的成瘤能力。综上初步证实了VEPH1是一个与肝细胞肝癌发生发展相关的重要抑癌基因。进一步研究探索了VEPH1改变肝癌细胞增殖、侵袭转移等生物学行为的机制，发现VEPH1能通过与TSC1形成复合体，影响TSC2磷酸化水平及TSC1/2复合物活性，调控PI3K/Akt/mTOR信号通路改变肝癌细胞生物学特性。