金花茶诱导肿瘤细胞凋亡的活性成分及分子机制研究

诱导肿瘤细胞凋亡已成为筛选抗癌药物的一个新的重要指标。前期研究证实金花茶种子乙醇提取物的正丁醇部分能诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡，而且其诱导PC3细胞凋亡与caspase依赖性线粒体途径相关。本项目拟对《中华本草》所收载的金花茶的种子中皂苷类成分进行分离、制备，以诱导肿瘤细胞凋亡为活性指标，对其总皂苷、化合物群和单体化合物的抗肿瘤活性进行筛选和评价。在此基础上，用Western blot分析检测Bcl-2、Bax的表达和释放到胞液中的细胞色素c浓度的变化，通过低聚化分析、免疫沉淀分析和Bax Western分析检测活性成分对细胞凋亡前体蛋白Bax活性位点的影响，探讨活性成分诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。此项研究为从中药中寻找和筛选新型抗肿瘤药物提供了理论与实践基础。

本项目对金花茶化学成分及其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制进行进行了研究。我们对金花茶种子醇提物的乙酸乙酯部分化学成分进行了分离，通过硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20、ODS等分离技术,分离得到5个化合物，分别为：香草酸(1)、羽扇豆醇（2）、β-谷甾醇（3）、山柰酚（4）、二氢山柰酚（5），以上5种单体均是从金花茶种子中首次分离得到的。对金花茶花的化学成分进行了研究，分离得到14个化合物，分别为：槲皮素-7- O-6-(E-咖啡酰基) -β-D-葡萄糖苷（1）、槲皮素（2）、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷（3）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（4）、芦丁（5）、牡荆素（6）、山奈酚（7）、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（8）、羽扇豆醇（9）、齐墩果酸（10）、胡萝卜苷（11）、β-谷甾醇（12）、原儿茶酸（13）、香草醛（14）。其中化合物1为新化合物，2～14均系首次从金花茶花中分离得到，除2、7、10外其他化合物均是首次从金花茶组植物中分离得到。对金花茶叶的化学成分进行了研究，分离得到4个化合物,分别为：山柰酚-3-O-(2-O-E-对香豆酰)-β-吡喃葡萄糖苷基-[(6®1)-a-L-鼠李糖基]-(3®1)-ß-吡喃葡萄糖苷(1)、β-谷甾醇(2)、胡萝卜苷(3)、3β-齐墩果烷-12-烯-十八烷酸酯(4)。其中化合物(1)为新化合物。.我们在前期研究中发现，金花茶种子具有较强的抗肿瘤作用，因此本研究将进一步探讨金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物诱导人子宫颈癌HelaS3细胞和人前列腺癌PC3细胞凋亡及其相关机制。金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物作用于人子宫颈癌HelaS3细胞和人前列腺癌PC3细胞后，引起细胞凋亡增加，Bax蛋白表达增强，Bcl-2蛋白表达抑制，Bid蛋白活性降低，线粒体膜电位降低及Caspase-8，Caspase-3活性增强。金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物为其抗肿瘤活性的有效部位，并可能通过激活Bax及Caspase-3，Caspase-8，抑制Bcl-2和Bid来诱导HelaS3细胞凋亡。.我们对从金花茶花中分离化合物1~4进行了抗肿瘤活性研究，发现化合物1~4均有诱导人单核细胞白血病细胞株U937细胞凋亡的作用，化合物1活性最强，具有时间和剂量依赖性，其诱导U937细胞凋亡与caspase依赖性线粒体途径相关。