IL-6介导JAK/STAT3通路关键分子在慢性萎缩性胃炎黏膜微环境中的响应及香砂六君子汤干预效应

Based on‘Spleen and stomach associated’theory and pathogenesis regularity of CAG, combined with theoretical background of inflammatory disease and even tumorigenesis caused by the imbalance of mucosal steady state that is evoked by related signaling pathways induced by IL-6 and our preliminary research, the study hypothesis was established, which is the response of JAK/STAT3 signaling pathway key molecules induced by IL-6 in chronic atrophic gastritis mucosal microenvironment and possible mechanism　of Xiangshaliujunzi decoction＇s interfering effects．As an object with CAG rats, on the basis of mucosa pathological assessment, then detecting the dynamic expression law of IL-6/JAK/STAT3 signaling pathway IL-6, JAK, STAT3 and EGF, CyclinD1, Bcl-xL, c-myc, mcl-1, VEGF gene protein of the lower reaches in the gastric mucosa tissue by using immunohistochemistry, Western blotting and RT-PCR technique. At the same time, the model rats are treated with Xiangshaliujunzi decoction guided by Spleen-strengthening, Qi-combing and Stomach-reconciling therapy . Then through correlation analysis, further revealing the mechanism of CAG and interfering effects of Xiangshaliujunzi on it from the perspective of the JAK/STAT3 signaling pathway key molecules induced by IL-6, the final purpose is to provide theoretical support for clinical application of this therapy and key technology of developing Chinese patent medicines against CAG.

本研究基于“脾胃相关”理论和CAG脏腑病机规律，结合IL-6介导相关信号通路诱发黏膜稳态失衡而导致炎性病变甚至肿瘤发生的理论背景以及前期工作基础，建立“IL-6介导JAK/STAT3通路关键分子在慢性萎缩性胃炎黏膜微环境中的响应及香砂六君子汤干预效应的可能机制”工作假说，以CAG大鼠为研究对象，在胃黏膜病理评估基础上，采用免疫组化、qPCR和蛋白免疫印迹技术检测IL-6介导JAK/STAT3信号通路上IL-6、JAK、STAT3以及下游EGF、CyclinD1、Bcl-xL、c-myc、mcl-1、VEGF基因蛋白在胃黏膜组织中的表达规律；并应用以健脾理气和胃法为指导的香砂六君子汤进行干预，通过相关性分析，拟从IL-6介导的JAK/STAT3信号通路关键分子角度揭示CAG的发生机制以及香砂六君子汤的干预作用，为该制剂的临床应用和开发防治CAG优势中成药的关键技术提供理论支撑。

本研究基于“脾胃相关”理论和CAG脏腑病机规律，结合IL-6介导相关信号通路诱发黏膜稳态失衡而导致炎性病变甚至肿瘤发生的理论背景以及前期工作基础，建立“IL-6介导JAK/STAT3通路关键分子在慢性萎缩性胃炎黏膜微环境中的响应及香砂六君子汤干预效应的可能机制”工作假说，开展相关研究。研究表明：.①CAG模型组大鼠一般生存状况不佳，表现出弓背弯曲、眯眼蜷缩、消瘦昏睡、厌食怠动、反应迟钝、被毛稀疏枯槁无光泽，每日平均摄食量减少，胃排空功能减弱，胃黏膜基础分泌功能和胃蛋白酶活性降低，大便量少质干或便溏。经中药治疗后，香砂六君子汤具有改善脾胃虚弱型CAG大鼠一般生存状况、提高平均每日摄食量和平均体质量、促进胃排空功能，提高胃黏膜基础分泌功能和胃蛋白酶活性，对CAG病程中损伤的胃黏膜具有改善作用。.②胃黏膜病理组织学研究显示，采用复合慢性损伤因素联合作用复建脾胃虚弱型CAG模型后，与空白组比较，脾胃虚弱型CAG组大鼠胃黏膜明显变薄，甚至可见胃黏膜全层萎缩，腺体排列稀疏，部分腺体增生性囊状扩张，黏膜及黏膜下层炎性细胞浸润。经中药香砂六君子汤干预后与模型组比较，香砂六君子汤组大鼠胃黏膜轻度变薄，腺体排列较为整齐，但有腺体萎缩、数量轻度减少，炎性细胞浸润不明显；且以香砂六君子汤高剂量对CAG病程中损伤的胃黏膜改善作用显著。.③脾胃虚弱型CAG组大鼠胃组织与炎性反应相关的IL-6、gp130、JAK、Stat3基因和蛋白表达显著升高，说明CAG大鼠胃黏膜慢性炎性病理反应与IL-6通路介导的关键分子活化水平异常增高有关；经中药治疗后，香砂六君子汤可下调IL-6、gp130、JAK、Stat3基因和蛋白表达水平。.④脾胃虚弱型CAG组大鼠胃组织Bcl-2、BCL-XL、CyclinD1基因和蛋白表达显著升高，说明CAG大鼠胃黏膜慢性炎性病理反应与IL-6通路介导的调控细胞增殖凋亡关键因子异常增高有关；经中药治疗后，香砂六君子汤可下调Bcl-2、BCL-XL、CyclinD1基因和蛋白表达水平。.⑤脾胃虚弱型CAG组大鼠胃组织VEGF、EGF基因和蛋白升高，说明CAG大鼠胃黏膜萎缩、变薄等病理改变可能与炎性病理反应所形成的组织微环境肿胀、黏膜慢性血供不足状态有关；而香砂六君子汤改善胃黏膜病理损伤的作用可能通过抑制与缺氧和炎性反应密切相关的VEGF、EGF基因和蛋白表达水平有关。