脯氨酰的顺反异构和半胱氨酸残基对精氨酸激酶的结构与功能影响的研究

本研究拟用来源于中国对虾的精氨酸激酶为模式蛋白，定点突变蛋白肽链上的脯氨酸和半胱氨酸残基，采用远紫外-圆二色光谱、荧光光谱、分子筛排阻层析以及酶活性分析等手段研究两种氨基酸残基对酶蛋白结构与功能的影响。定点突变脯氨酸残基并结合PPIase的作用，研究脯氨酰残基对折叠的影响，本项研究将为精氨酸激酶的折叠过程中出现的脯氨酰的顺、反异构现象提供直接的证据；以野生型和脯氨酸突变型的精氨酸激酶分子为靶蛋白，研究来源于人的PPIase（FKBP，cyclophilin）的分子伴侣的功能，为阐明PPIase兼有分子伴侣功能提供一些有意义的证据；定点突变半胱氨酸残基，研究半胱氨酸残基在精氨酸激生物学酶功能中的地位，为澄清可反应半胱氨酸的地位提供有力的证据；研究脯氨酸和半胱氨酸突变体的结构域和整体结构的稳定性，研究结果将为脯氨酸和半胱氨酸残基可以作为蛋白质分子的内源开关的推论提供一些有意义的证据。