脑缺血性梗死后微血管生成对组织损伤修复作用及机制的研究

脑梗死是目前严重威胁人类健康的重要疾病之一，其病死率和致残率均很高。脑缺血是导致脑梗死的一个主要因素，缺血诱导VEGF、Ang-2等血管生成因子的分泌，促进微血管生成，有利于缺血区域组织血液灌流，保护组织细胞免受缺氧性损伤。然而，新生血管通透性较大，促使脑水肿的形成。血管生成是一个多基因、多种信号通路调节的复杂过程。脑缺血激活Src激酶，其可能通过VEGF等血管生成因子，促进脑微血管通透性增加。本课题通过PP1抑制剂、RNA干扰等方法抑制脑缺血后Src激酶活性，从而选择性抑制VEGF诱导的血管通透性增加，发挥其促血管生长作用，为临床脑缺血性梗死合理治疗提供理论基础。通过阐明与能量代谢相关的核转录辅激活因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α (PGC-1α)在缺氧缺血后微血管生成中的作用,为临床脑缺血的治疗提供新思路。

本研究主要检测了Src、SSeCKS、VEGF和Angiopoietins等在脑缺血性梗死后的表达变化，分析它们之间的关系，探讨其对血管生成和血管通透性改变的影响，揭示它们在脑缺血性梗死发生发展过程中的作用。Longa线栓法制作大脑中动脉阻塞脑缺血模型，分别于缺血后不同时间点断头取脑。利用HE染色光镜下观察脑缺血后组织损伤的病理学变化；采用RT-PCR 和Western blot方法检测大鼠脑缺血后不同时间点Src、SSeCKS、VEGF、Angiopoietin-1 (Ang-1)、Angiopoietin-2 (Ang-2)及ZO-1 mRNA和蛋白的表达；利用免疫组织化学方法检测这些因子在脑组织中的细胞定位；利用CD31和GFAP分别用来标记大鼠脑缺血后微血管和星形胶质细胞的数量变化；Evans Blue检测血脑屏障的通透性，干湿重法检测脑组织含水量，TTC染色法检测脑梗死体积，并统计学分析各因子在脑缺血后的表达变化，分析它们之间的关系。研究得出以下结论：1. 大鼠脑缺血后Src蛋白表达逐渐增高，抑制SSeCKS的表达；2. 脑缺血早期VEGF和Ang-2表达增高，促进血管的出芽生长，同时诱导血管通透性增加，促进脑水肿的形成，加重缺血性损伤；脑缺血后期Ang-1表达增高，促进血管的成熟稳定，抑制血管通透性的增加，有利于损伤组织的修复。3. 大鼠脑缺血后Src和SSeCKS可能通过调节VEGF、Ang-1和Ang-2的表达，进而影响ZO-1的表达，参与新生血管生成和脑水肿的形成，在组织损伤修复过程中发挥着重要作用。