白藜芦醇促进线粒体形成对缺血性脑损伤的保护作用及机制研究

近年来国内外的研究显示，白藜芦醇（Resveratrol, Res）对缺血性脑损伤具有明显的保护作用，但作用机制仍需进一步探讨。我们的研究证实，Res可以明显减小脑梗死体积和脑水肿程度，急性期可降低MMP-9的表达，恢复期可增加VEGF,MMP-2的表达。进一步研究发现Res能够提高体外培养的原代神经元mtDNA的含量。这一结果提示，Res在缺血性脑损伤中对细胞亚单位线粒体形成可能有一定的影响，结合国内外研究，我们创新性提出Res可能通过诱导线粒体形成发挥脑保护作用，这与缺血再灌注损伤机制中的"能量供应障碍学说"相符。为此，本课题拟通过电镜、realtime PCR、Western blot及基因沉默等方法，深入探讨Res作用下缺血再灌注损伤前后线粒体形成及其相关基因的变化，证实Res促进线粒体形成对缺血性脑损伤的保护作用，探讨其作用机制，为Res的临床应用提供进一步的实验室依据。

目的：通过体外原代神经元细胞培养和动物研究，验证白藜芦醇预处理对缺血前和缺血后线粒体形成的作用及潜在机制。.方法：采用电镜、Real time PCR、Western blot、基因芯片及慢病毒干涉等技术从形态学、定量分析及分子机制等角度对线粒体的形成及相关信号分子进行检测；.结果：.1. 白藜芦醇预处理能够明显增加体外培养小鼠神经元ATP含量，提高mtDNA表达水平，并上调线粒体形成相关分子的Tfam、NRF-1、NRF-2和PGC-1α的基因表达。.2. 白藜芦醇预处理能够明显促进脑组织ATP含量增加，提高mtDNA表达水平，增加线粒体的数量。且蛋白印迹和Real time PCR发现，白藜芦醇能促进线粒体形成相关分子的基因和蛋白表达。.3. 白藜芦醇预处理能够明显增加小鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织ATP水平、mtDNA拷贝数及线粒体数量，降低MPO和MDA水平，提高SOD和GSH水平，增高粒体复合体I,II,III水平；.4. 干涉SIRT1，可明显抑制白藜芦醇对ATP水平和mtDNA拷贝数的影响；并限制白藜芦醇对线粒体形成相关分子水平的提高。.结论：.1. 通过体外原代神经元细胞培养和动物实验，证实白藜芦醇预处理能够促进线粒体形成。.2. 白藜芦醇预处理能够发挥脑缺血性损伤保护作用，其不仅能够促进缺血后线粒体形成，影响线粒体的氧化应激，并且能够影响线粒体复合体的活性。.3. 白藜芦醇有可能是通过影响SIRT1发挥促进线粒体形成的作用。其发挥作用的具体模式有可能是不依赖于PGC1-a实现的。