失血性休克-复苏后髓系抑制性细胞的免疫效应及信号传导机制研究

Serious immune disorders often followed hemorrhagic shock (HS). The active myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) could execute remarkable immunosuppressive effect. We have found the MDSCs changed in different tissues and organs of rats with hemorrhagic shock when resuscitated by different kinds of fluid in the previous study. In this research, we plan to establish HS mouse model, dynamically observe the changes of MDSCs in terms of quantity and function in bone marrow, peripheral blood, liver, spleen and intestinal mucosal after HS, and further investigate the mechanism of MDSCs proliferation, migration and activation and its effect on mononuclear macrophage after HS. Meanwhile, studies on mechanisms and signal transduction pathway (such as PGE2-STAT3 and IL-4-STAT6) in HS couple with sepsis (HSS) and HSS with different fluid resuscitations are also necessary. We hope to provide theoretical basis for immune function regulation and the new therapy of HS.

失血性休克常可继发严重免疫紊乱，髓系抑制性细胞（MDSCs）具有免疫抑制作用，是机体正常免疫炎症反应网络中的重要一环。在前期研究中我们发现，失血性休克大鼠不同液体复苏后MDSCs的分布、数量和功能发生变化。本研究计划通过小鼠失血性休克模型，动态观察失血性休克后骨髓、外周血、肝、脾和小肠黏膜中MDSCs数量及其功能状态的变化情况，深入地探讨失血性休克后MDSCs增殖、迁移和活化机制及其对单核巨噬细胞功能的影响。鉴于液体复苏是失血性休克的救治基础，而脓毒症常继发于创伤失血性休克，故也有必要研究失血性休克以及失血性休克＋脓毒症双重打击小鼠不同液体复苏后MDSCs数量、迁移和功能状态的动态变化规律及其机制，并对其中可能的信号传导机制（如PGE2-STAT3和IL-4-STAT6通路）进行证实和研究。希望通过上述研究能为调理创伤失血性休克后机体免疫功能和探索临床救治新方法提供相应的理论基础。

失血性休克常导致免疫紊乱。髓系抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）是一群来源于骨髓的异质性细胞，G-MDSC和M-MDSC是两个主要细胞亚群。MDSCs参与肿瘤及脓毒症休克等多种原因导致的免疫紊乱。液体复苏是治疗失血性休克的基础，等渗盐水（normal saline，NS）、高渗氯化钠（hypertonic saline，HTS）和羟乙基淀粉（hydroxyethyl starch，HES）是临床和科研常用复苏液体，有必要观察使用其复苏后对MDSCs的影响。.大鼠失血性休克模型研究休克后使用NS、HTS和HES复苏后外周血、脾及骨髓MDSCs变化及精氨酸酶和诱生型一氧化氮合酶mRNA表达。结果证实，使用不同液体复苏会对不同部位的MDSCs产生不同影响。.建立小鼠创伤-失血休克无复苏模型，观察外周血、脾和骨髓MDSCs分布及亚群变化。结果显示，休克应激刺激后，MDSCs即刻出现改变，早期为外周血MDSCs增多且向G-MDSC分化增加。建立小鼠创伤-控制性失血休克复苏模型。结果表明，NS、HTS和HES复苏后不同时间点，外周血、脾和骨髓MDSCs数量和亚群分化发生不同改变。HTS复苏后外周血和脾MDSCs数量升高出现早，对MDSCs的亚群分化影响显著。而HES在骨髓微环境中对MDSCs亚群分化影响更大。通过创伤-控制性失血休克+菌血症双重打击复苏模型，观察到HTS复苏对外周血和骨髓MDSCs分布的影响持续时间更久，HES对骨髓MDSCs亚群的影响出现晚，诱导向G-MDSCs分化的能力更强。.分选外周血MDSCs并检测其对T细胞增殖抑制的能力及stat3和stat6活化情况。结果证实，在单纯失血性休克复苏模型中NS、HTS和HES能够影响外周血MDSCs数量，而不改变MDSCs功能。而休克+菌血症双重打击小鼠模型结果表明，三种液体复苏后外周血MDSCs均具有抑制T淋巴细胞增殖的功能，其中HES复苏后MDSCs抑制功能较强，可能不利于外周血细菌清除。此外，Western blot结果提示，三种液体复苏后外周血MDSCs细胞中stat3和stat6信号通路均出现活化现象，细胞可能处于增殖或免疫抑制功能活化状态。