粪肠球菌基因敲除突变株的构建及其在根管内致病性的研究

粪肠球菌天然具有抵抗常规根管消毒药物的能力并能形成根管内持续感染，是引起根管治疗失败的首要病原菌。近年来的研究表明粪肠球菌造成根管治疗失败不仅仅因为其拥有众多的毒力因子，更重要的是它能够在根管消毒药物持续存在和缺乏营养的条件下长期生存，并且难以用机械化学预备的方法清除。粪肠球菌的明胶酶基因（gelE基因），丝氨酸蛋白酶基因（sprE基因），凝集物质基因（asa基因），胶原黏附素基因（ace基因）等，被认为与其在高温、高渗、高pH值条件下粘附牙本质、形成生物膜等致病性有关，但确切功能和分子机制尚不清楚。本项目收集粪肠球菌标准株和临床分离株，采用同源重组的方法对目的基因进行基因敲除，观察基因敲除突变株在根管环境中致病能力的改变（包括耐高pH值环境的能力、耐受营养物质缺乏的能力、与牙本质粘附的能力和形成生物膜的能力），为防治粪肠球菌根管内感染提供线索。

粪肠球菌（Enterococcus faecalis）天然具有抵抗根管消毒药物的能力并能形成根管内持续感染，是引起根管治疗失败的主要病原菌。近年来的研究表明粪肠球菌造成根管治疗失败不仅仅因为其拥有众多的毒力因子，更重要的是它能够在根管消毒药物持续存在和缺乏营养的条件下形成生物膜、长期生存，并且难以用机械化学预备的方法清除。粪肠球菌的明胶酶基因（gelE基因），丝氨酸蛋白酶基因（sprE基因），凝集物质基因（asa基因），胶原黏附素基因（ace基因）等，被认为与其在高温、高渗、高pH值条件下粘附牙本质、形成生物膜等致病性有关，但确切功能和分子机制尚不清楚。本项目收集粪肠球菌标准株和临床分离株，采用同源重组的方法对目的基因进行基因敲除，观察基因敲除突变株致病能力的改变。. 在青年基金项目的执行过程中，本课题组分别构建了gelE、cylA、efaA、asa等基因敲除的粪肠球菌突变株，其生长曲线、耐药性等特征均未发生明显变化；都能够独立形成成熟的生物膜结构；ΔcylA、ΔefaA、Δasa等突变株与变形链球菌（Streptococcus mutans）形成双菌种混合生物膜的能力也未发生明显变化。但是ΔgelE突变株却不能与变形链球菌形成双菌种混合生物膜。这一现象的发生机制是本课题组下一步研究的重点。. 在三年的项目执行期内，本课题组共发表相关SCI论文5篇；以前期工作为基础，获得国家自然基金委“青年-面上连续资助项目”一项。