Laminin-511在非瘢痕性脱发疾病中的作用

Laminin-511 是皮肤基底膜的重要组成成分。我们的成果显示Laminin-511在毛发的胚胎发育期起关键调控作用。按照老鼠成体毛发循环再生的不同阶段，体内注射外源性Laminin-511，发现其加快毛发循环再生的生长期启动，并延缓向退行期进展。此项目，我们将对Laminin-511调控毛发循环再生和非瘢痕性秃发的机理进行研究。应用体内细胞移植术验证Laminin-511调控毛发上皮-真皮的信号传导。在非瘢痕性秃发样本中用Real-time PCR、免疫荧光染色、流式细胞、及Lable-Retaining Assay寻找毛发生长因子及上皮干细胞分化因子的缺陷（Wnt、Shh、Noggin、BMP、KRT15、CD200及CD34等）。最后应用外源性Laminin-511蛋白对非瘢痕性脱发进行信号修复，从而揭示Laminin-511调控非瘢痕性秃发的分子信号学机理。

目的 通过创建二氢睾酮（DHT）诱导的雄激素性脱发（AGA）小鼠模型，研究DHT与毛囊循环再生中的分子信号学机理。从而为进一步清楚地阐明AGA发病机制，并为具有抑制毛囊脱落和促进毛囊再生的活性大分子药物研发建立坚实的理论依据。.方法 利用DHT浓度梯度法结合有机载体对正常适龄雌性小鼠进行皮下给药，并通过人工脱毛使小鼠毛发生长周期同步化。通过H&E染色观察DHT处理后不同时期毛囊形态结构以及毛囊数目的改变；通过RT-PCR鉴定AGA标准性DHT信号传导通路关键突变基因，确定AGA小鼠模型的建立。最后，利用RT-PCR对影响不同时期毛囊循环再生的关键信号通路（包括：毛囊干细胞标志物、细胞外基质主要成分以及促毛发生长有关信号分子）进行筛查，建立AGA的细胞分子学致病机理。.结果 通过H&E染色观察发现在不同浓度DHT后的小鼠在毛发生长不同阶段均表现出典型的毛囊小型化和头发稀疏。RT-PCR结果显示，在整个毛发生长周期中AR表达水平几乎都呈上升趋势，而在D40和D48天呈下降趋势。通过对毛囊干细胞表面标志物的mRNA表达水平进行分析发现，Lgr5的表达水平在Telogen-Anagen VI期之间呈下降趋势，而CD34的表达水平无明显变化。在进一步的研究中我们发现，当外源增加DHT含量，细胞内AR含量也相应增加，促毛发生长因子FGFR、IGF-BP5、Ptch1以及Wnt信号表达水平降低；但在D40和D48天AR含量没有明显增加，甚至呈下降趋势，而细胞内的PDGFRα的表达水平与对照组相比明显降低。而对细胞外基质的表达分析发现，在D12和D52天laminin α3的表达水平上调，而在D12、D48和D52天laminin α5的表达水平下调。.结论 DHT处理后小鼠皮肤中促毛发生长因子FGFR、IGF-BP5、Ptch1以及Wnt信号的表达呈下降趋势，表明DHT能够活化DP细胞中的AR受体，与毛囊上皮细胞相互作用，对促毛发生长因子FGFR、IGF-BP5、Ptch1以及Wnt信号的表达产生抑制作用。此外，DHT处理后小鼠皮肤中laminin-511与laminin-332的合成与分泌异常，表明DHT最终通过调节细胞外基质中laminin的组成对毛囊干细胞的活化以及细胞迁移、分化发挥调控作用，使个体表现出毛发生长迟缓，毛囊分布不均等多种病理特征。