诺氏内阿米巴与人阿米巴病的相关性研究

肠道原虫溶组织内阿米巴每年引起全世界5千万人患阿米巴性结肠炎和肠外阿米巴脓肿，导致每年10万人死亡，为重要的公共卫生问题。前期的研究在中国的恒河猴体内检测到诺氏内阿米巴，证实该原虫与溶组织内阿米巴的蛋白表达谱相似性较大，分类基因与溶组织内阿米巴有一定差异，为了解诺氏内阿米巴与人阿米巴病的相关性，在上述初步结果的基础上，本课题拟系统考察和研究诺氏内阿米巴分类基因与溶组织内阿米巴的差异，了解诺氏内阿米巴的致病基因的表达特征、生物化学和分子生物学特点；阐明诺氏内阿米巴对不同来源的细胞模型和动物模型的致病特点，是否存在宿主细胞表面受体的差异性和宿主免疫系统在致病中的作用；研究在诺氏内阿米巴滋养体内过表达溶组织内阿米巴致病基因或基因敲除后其致病性的变化，检测其引起的细胞凋亡、吞噬细胞等一系列细胞组织变化，研究诺氏内阿米巴代谢关键酶与致病的关系；进行生物信息学分析和虫株溯源，得出其人兽共患的潜力。

溶组织内阿米巴是人类阿米巴病的唯一病原体，每年不仅引起全球5千万人感染而且有10万人死亡。其危害在寄生原虫疾病中仅次于疟疾，是重要的公共卫生问题。从非人类灵长类动物分离到的对实验动物具致病性的诺氏内阿米巴是否可能成为人类阿米巴病的潜在病原体值得深入研究。本项目以显微镜检查和PCR扩增测序分析了广西、贵州、四川等地的猕猴的粪便标本；对分离的虫株进行无菌化和克隆化培养；应用简并引物对诺氏内阿米巴的致病因子和重要酶类进行克隆测序；以实时定量PCR检测分析比较诺氏内阿米巴与溶组织内阿米巴的致病过程中基因表达的差异情况；应用实验动物模型进行致病性和病变组织损害严重性的比较分析；检测细胞因子基因在致病过程中的变化，观察滋养体吞噬细胞、致细胞凋亡、对细胞毒性作用和附着作用的变化；制备了一系列单克隆抗体以荧光共聚焦显微镜观察提示诺氏内阿米巴与溶组织内阿米巴存在相似表位。研究提示，诺氏内阿米巴的宿主特异性高，在不同宿主的表现各异；宿主的种属差异和地域都是影响诺氏内阿米巴基因多态性的因素；其进化中原虫与宿主的相互作用，影响了原虫适应宿主而发生关键基因的适应性变化，诺氏内阿米巴难以成为人类阿米巴病的主要病原体。