Dll4介导的Notch信号通路在肺腺癌肿瘤血管生成中的机制研究

本课题将从肺腺癌赖以生存的肿瘤血管着手，在我们前期纯化和结晶肿瘤血管生成关键通路Notch信号通路的相关蛋白以及抗小鼠肺腺癌肿瘤血管生成的基础上，进一步利用免疫组化、westernblot、流式细胞仪和RT-PCR明确抗肿瘤血管关键因素Dll4/notch在肺腺癌中蛋白和mRNA水平的表达，并构建原核和真核载体对基因的蛋白表达，进行纯化和衍射解析蛋白的结构，在此基础上利用基因剔除和突变技术筛选出相关功能区，探讨其与肿瘤血管内皮细胞迁移、生长的关系，明确其在肿瘤血管重构中的作用机理以及阻断该通路导致肿瘤血管异常发育的机理；构建高表达Dll4的ACL裸鼠模型，利用MVD、CT和MRI评价其肿瘤血管生成状况，同时根据筛选的相关蛋白功能区阻断Dll4介导的信号通路，使肺腺癌肿瘤血管不仅在数量上减少同时将其去功能化，为肺腺癌抗肿瘤血管生成治疗提供新靶标。

本课题组通过不断优化、提纯，研究并获得Notch通路中重要蛋白分子TLE1-Q的蛋白晶体；通过设计、构建Dll4分子的真核表达质粒及其特异性干扰片段，利用体内、外实验研究观察Dll4分子对血管细胞生物学行为的影响并发现， Dll4分子在肿瘤血管中对内皮细胞的抑制生长，迁移，减少血管腔形成的生物学作用；我们成功建立了血管内皮细胞和肿瘤细胞体外共培养模型，Notch通路的肺癌动物荷瘤模型；通过共培养实验研究观察Dll4分子对肿瘤细胞的生长、肿瘤发展的影响，出血管中Dll4分子能通过与肿瘤细胞上的Notch受体结合，活化Notch通路来抑制肺腺癌A549细胞生长，肿瘤发展；通过机制研究发现，肺癌中Notch通路与PTEN-PI3K-AKT通路间存在交叉调控作用，并在肿瘤生长过程中发挥一定作用。揭示了Notch通路，尤其是Dll4介导的Notch通路在肺腺癌中的重要作用，为肺癌Notch通路研究提供理论基础和实验依据。