贵州省汉族、苗族和布依族人群幽门螺杆菌耐药和毒力表型及其相关基因多态性

This study is aimed to characterize the geographic diversity of Helicabacter pylori strains isolated from the Han people of Guiyang city and from the Buyi and the Miao people of Qiannan autonomous prefecture.The regional polymorphism of Helicobacter pylori strains will be evaluated in two aspects:1. Antibiotic resistance phenotype and related gene mutations.2.Distribution of clinical infection type including gastritis,gastric ulcer,duodenal ulcer and gastric cancer,and distinct diversity of virulence genes including cagA,vacA, iceA and HP0519 genes . Helicobacter pylori will be isolated from patients and antibiotic resistance will be detected by agar dilution method.The resistance assosiated gene fragments will be amplyfied by PCR and then sequenced.Gene sequences of susceptible strains and resistant strains from the Han ,the Miao and the Buyi people will be compared respectively in order to characterize the regional polymophism of gene mutations of local resistant isolates. The presence of the cagA gene,vacA，iceA and HP0519 alleles will be determined by PCR from Helicobacter pylori DNA. Carboxy-terminal variable region of cag A will be amplified by PCR and then sequenced. The nucleotide sequences will then be translated into aminoacid sequences,and the Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala (EPIYA) motifs patterns will be analyzed and grouped.Antibiotic resistance phenotype,resistance associated gene mutation,distribution of different clinical infection type and virulence gene characters of these three ethnicity will be compared by Chi-Square test.

对贵州省贵阳市汉族和黔南州布依族、苗族胃镜检查患者进行幽门螺杆菌的分离培养、鉴定，以琼脂稀释法检测各菌株药物敏感性，对各菌株进行耐药相关基因片段的PCR扩增测序和序列比对分析；以PCR的方法检测各菌株毒力基因或等位基因，进行毒力基因型或亚型的鉴别，以及对cagA3'端可变区扩增测序并翻译为氨基酸序列后进行 Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala (EPIYA) 基序的比较和聚类分析。将本省汉族、布依族、苗族来源的幽门螺杆菌耐药表型和耐药基因突变特征、临床类型和毒力基因多态性进行比较和统计学分析，展示我省主要少数民族来源菌株的毒力和耐药相关基因结构特点，补充中国幽门螺杆菌菌株中少数民族来源菌株的分子流行病学特征，为进一步研究无创性筛查幽门螺杆菌致病菌株感染和耐药性快速检测，制定个性化治疗方案奠定基础。

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, Hp）是多种上胃肠道疾病的重要致病因素，为I类致癌因子，其基因和表型多样性是感染和临床结局多样性的重要原因。了解本地菌株的耐药和毒力表型及基因特征对于探索快速、准确的感染和耐药诊断方法，选择抗菌药物及了解预后具有重要意义。. 本研究对1773例贵阳和431例黔南患者进行了Hp的分离、鉴定和药敏检测，对各菌株进行了耐药相关基因的测序分析；将耐药菌相关基因转化至敏感菌，以抗生素筛选耐药克隆，并对相应基因进行测序，探索基因突变和耐药的关系。以 PCR 的方法对各菌株进行了毒力基因型的鉴别，以及对 CagA3’端可变区氨基酸序列进行了EPIYA基序的比较和聚类分析。. 结果表明，贵阳菌株克拉霉素、阿莫西林、左氧氟沙星、四环素、甲硝唑、耐药率分别为：33.1%、14.0%、38.5%、17.1%、68.4%，黔南州各药物耐药率分别为：45.3%、25.3%、54.7%、14.7%、62.1%。23S rDNA V区, 16SrDNA V区和gyrA突变分别与克拉霉素、四环素和左氧氟沙星耐药有关,rdxA，frxA和fdxB 突变与甲硝唑耐药相关，pbp1突变与阿莫西林耐药相关，但均存在复杂的碱基多样性，后续计划以重叠PCR和转化构建定点突变株，明确与耐药相关的突变。. 因本地菌株多重耐药普遍，故超出计划，我们以RT-PCR对药物外排泵hefABC基因表达与多重耐药的关系进行了研究，发现这三个基因的高表达与Hp多重耐药有关。. 本地Hp的阳性率男性大于女性，以溃疡组培养阳性率最高。这些菌株的cagA、vacA、iceA基因型存在复杂多样性，在成年和儿童、贵阳和黔南、农村和城市以及汉族和少数民族间的分布未见显著差异。本地Hp均为cagA阳性菌株，以东亚型 EPIYA-ABD 型多见，西方型仅存在非萎缩性胃炎组；vacA 以vacAs1c/m2多见，iceA以iceA1多见，iceA和vacA基因型分布与胃黏膜病理类型未见明显相关性。. 此外，本项目保藏了400余株Hp菌株，被NCBI接收并公开一株多重耐药Hp的基因组序列；研究中发现，胃内存在大量非Hp，包括尿素酶阳性的细菌，故超出计划，我们对胃内非Hp进行了鉴定，为后续探讨胃内菌群在胃部疾病以及抗Hp治疗中的影响和意义奠定了基础。