世界长寿之乡巴马县人群幽门螺杆菌基因多态性及其与环境交互作用研究

Helicobacter pylori (Hp) are the main pathogenic factors of various stomach and duodenum diseases. The infection rate and incidence of different populations in different regions is not proportional. Bama County of Guangxi is a world famous longevity, where exist a phenomenon of high infection arte of Hp, while low incidence, and the mechanism remain unclear. Studies have shown that Hp exist polymorphism, leading to different populations in different regions vary in virulence of Hp, and the virulence of Hp was mostly related to cytotoxin associated gene (CagA), vacuolating cytotoxin gene (VacA) and others. Based on our early achievements, study on the mechanism and genotype of Hp strain drug resistance in Guangxi people, this study intends to analasis the gene polymorphism and genotype of hp by collecting the gastric mucosa and saliva of people in Bama County and Yunnan Guizhou Guangxi border provinces,isolating and cultrueing hp stains, DNA sequencing and RAPD methods. Techniques such as RT-PCR was using to test the virulence factors, screen out high and low toxic strains, Hp growth environment in the stomach and in vitro, the changes cytotoxin associated gene (CagA) and vacuolating cytotoxin gene (VacA) were also tested, further clarifies the genetic characteristics of Hp in regional differences and methods inducing virulence attenuated, thereby offering the valuable experimental evidences for the prevention and treatment of Hp.

幽门螺杆菌（Hp）是胃、十二指肠疾病的主要致病因子，在不同地区、不同人群感染率和发病率不成正比。广西巴马县是世界著名的长寿之乡，巴马长寿老人普偏存在Hp感染率高，而发病率低的现象，其机理目前尚不清楚。 研究证明，Hp菌株存在多态性，导致不同地区不同人群Hp的毒力各不相同。Hp的毒力主要与细胞毒素相关基因(CagA )、空泡毒素基因(VacA)等有关。 基于Hp基因多态性，本项目在前期研究广西人感染Hp耐药机制和基因型的基础上，采集巴马县人群和滇黔桂三省交界地区人群的胃粘膜或唾液，分离培养Hp，采用DNA 测序、RAPD等技术分析菌株基因多态性、基因型；RT-PCR等技术检测菌株毒力因子，筛选高、低毒力菌株及其在人胃内生长环境，体外模拟生长环境诱导菌株生长，检测毒力因子CagA、VacA等基因的变化，探讨Hp菌株在地域差异中的基因特点和诱导菌株毒力减弱的方法，为防治Hp提供重要实验依据。

幽门螺杆菌（Hp）是胃、十二指肠疾病的主要致病因子，在不同地区、不同人群感染率和发病率不成正比。广西巴马县是世界著名的长寿之乡，巴马长寿老人普偏存在 Hp 感染率高，而发病率低的现象，其机理目前尚不清楚。因此本项目开展巴马县人群幽门螺杆菌基因多态性及其与环境交互作用研究，以期阐述巴马县人群感染的Hp致病机理。主要内容研究之一，共采集胃粘膜和口腔唾液样本842例，经分离培养和三酶（氧化酶、尿素酶、过氧化氢酶）及革兰氏染色鉴定获得238株Hp，其中巴马县人群来源的135株，百色及其它县市人群来源的103株，建立了较丰富的Hp样本库。主要内容研究之二，对巴马县135株Hp进行多态性分析，按照毒力因子分型，CagA（+）/VacA（+）/iceA（+）42株、CagA（+）/VacA（+）41株、VacA（+）/iceA（+）8株、VacA（+）44株；随机选取115株（有效测序113株）进行MLST分型，可以分为28个型，按照80%相似性聚类可分为23类，Hp呈高度多态性，而且其聚集程度与胃病史和耐药性等因素明显相关，这为探讨菌株毒性与耐药之间的特性提供了重要的线索。主要内容研究之三，对菌株来源的背景资料等进行分析，并经最低抑菌浓度（MIC）检测、长链非编码芯片检测和RT-PCR等实验证明火麻仁及其成分亚麻酸对Hp具有一定的抑制作用，低剂量亚麻酸能降低Hp的毒性，硒、铁等元素也能降低Hp的毒性，这为通过食品保健方法降低菌株毒性减少发病率提供了重要的实验依据。主要内容研究之四，对3个不同来源的菌株进行了全基因组测序，三个菌株均为环状核苷酸序列，序列长度分别为1,563,701、1,534,481、1,534,930，基因总数分别为1,571、1,792、1,732，为发现不同菌株之间毒力基因和耐药基因之间的差异奠定了较好的基因组学基础。主要内容研究之五，拓展研究Hp与胃癌发生发展的关系，通过长链非编码芯片检测及体内外实验验证发现Hp能调控lnc-ZFAS1→has-miR-125a-5p→HUR和LINC00894→has-miR-146a-5p→WASF2，促进胃癌的增殖和转移； AG490可能通过阻断JAK2/STAT3信号通路降低leptin的表达，进一步抑制胃癌细胞增殖，这为防治胃癌的发生发展提供了重要的参考。