抗肝炎二肽JBP485经药物转运体的肾排泄及与头孢氨苄相互作用的分子药代动力学机制

JBP485是化学合成的羟脯氨酸和丝氨酸(Hydroxyprolylserine)低分子水溶性二肽，有明显的口服抗肝炎活性。前期工作已完成JBP485的胃肠道吸收机制研究，并正在进行JBP485经胆汁排泄的分子药代动力学机制研究。最近首次发现JBP485不仅经大鼠肾脏pept2重吸收，还由oat1和oat3所排泄。本研究拟采用先进的LC-MS-MS方法作为检测手段、利用药物转运体基因转染细胞技术、新鲜大鼠肾切片、RT-PCR法、Western blot、Northern blot等方法，通过in vivo、in vitro等手段观察pept2、oat1和oat3等转运体对JBP485肾排泄的影响，并阐明JBP485与b－内酰胺抗生素头孢氨苄联合用药时在转运体水平上的分子药代动力学机制。该研究成果对阐明二肽类药物的肾脏排泄机制以及药物相互作用的分子药代动力学机制具有重要的理论价值和临床意义。

本研究采用LC-MS/MS作为检测手段，利用大鼠体内实验、肠灌流实验、翻转肠实验、转运体基因转染细胞技术、新鲜大鼠肾切片、RT-PCR、Western blot等方法，（1）首先考察了JBP485与头孢氨苄在大鼠体内的药物相互作用（DDI），发现JBP485与头孢氨苄竞争性抑制大鼠肠道Pept1，导致彼此吸收减少；静脉联用后二者的肾脏清除率显著降低，JBP485与头孢氨苄可相互抑制彼此经肾切片的摄取，且两药可被hOAT1/3-HEK293细胞特异性摄取，证实JBP485与头孢氨苄是hOATs的底物。因此，JBP485与头孢氨苄同时给予大鼠可发生明显的DDI，作用靶点在小肠（Pept1）和肾脏（Oats）。（2）为了进一步考察JBP485经人PEPT1（hPEPT1）的摄取、转运和调节，本研究选择Caco-2细胞模型，发现PEPT1底物可显著抑制Caco-2细胞对JBP485的摄取和转运；用维拉帕米上调Caco-2细胞的PEPT1表达提高JBP485的摄取，而抑制或下调PEPT1则减少其摄取。结果证明了JBP485是hPEPT1的底物，合用维拉帕米可增加JBP485的吸收，而合用锌离子或乙醛可减少其吸收，这对指导临床合理用药有重要意义。（3）为了直接考察hPEPT1对JBP485的作用，本研究还成功构建了hPEPT1 /2-HeLa稳定转染细胞，发现hPEPT1/2对JBP485的Km分别为1.33和0.144 mM，最适pH分别是5.8和6.5；JBP 485抑制Gly-Sar在hPEPT1/2-HeLa细胞摄取的Ki分别为8.11和1.05 mM。结果直接证明了JBP485是hPEPT1/2的底物，hPEPT1/2可介导JBP485与底物药物的DDI。（4）最后，本研究构建了大鼠急性梗阻性黄疸模型，发现JBP485治疗后， BIL、ALT及AST显著下降，肝脏的受损程度明显减弱，肾脏Oat1和Mrp2表达均显著增多，胆红素从尿液中排泄增加。结果表明JBP485可恢复急性肝损伤状态下Oats的下调，进一步提高上调Mrp2，使毒物排出增多，肝肾负担减轻，从而治疗由ANIT引起的胆道梗阻。该研究成果对阐明二肽类药物的肾脏排泄机制以及药物相互作用的分子药代动力学机制具有重要的理论价值和临床意义。