多囊肾病中NHERF1及其磷酸化对β-catenin调控机制的研究

常染色体显性多囊肾病(ADPKD)是最常见遗传性肾病，占终末期肾病病因第四位，其发病机制尚未阐明，仍缺乏有效治疗手段。Wnt/β-catenin信号通路异常激活在ADPKD发生中发挥重要作用。我们在前期磷酸化蛋白组学研究中发现一种能够与β-catenin相互作用的蛋白-Na+/H+ 交换调节因子1（NHERF1），并证实该蛋白在多囊肾组织中表达明显增多，出现核异位,在多囊肾囊肿上皮细胞系中与β-catenin存在相互作用。本研究拟通过免疫共沉淀、激光共聚焦进一步证实NHERF1与β-catenin在多囊肾组织中的相互作用及磷酸化对相互作用的影响；联合点突变、基因转染及siRNA干扰技术研究NHERF1对β-catenin表达，定位及转录活性的调控；最后观察对多囊肾囊肿上皮细胞生物学行为的影响。以期探讨NHERF1及其磷酸化在ADPKD发生中的作用，为寻找ADPKD治疗新靶点提供实验依据。

常染色体显性多囊肾病(ADPKD)是最常见遗传性肾病，占终末期肾病病因第四位，其发病机制尚未阐明，仍缺乏有效治疗手段。Wnt/β-catenin信号通路异常激活在ADPKD发生中发挥重要作用。我们在前期磷酸化蛋白组学研究中发现一种能够与β-catenin相互作用的蛋白—Na+/H+ 交换调节因子1（NHERF1），并证实该蛋白在多囊肾组织中表达明显增少，在多囊肾囊肿上皮细胞系中与β-catenin存在相互作用。在本研究中,我们进一步应用western blot证实NHERF1在人和动物多囊肾组织中表达均减少,并且在多囊肾囊肿衬里上皮细胞中表达也减少。免疫共沉淀和激光共聚焦证实，其在多囊肾组织中，与β-catenin存在相互作用。构建野生型NHERF1、突变型NHERF1（S339A）和突变型NHERF1（S339D）真核表达载体，并转染多囊肾囊肿衬里上皮细胞（WT 9-12），结果发现NHERF1磷酸化，并不影响其与β-catenin的相互作用。随后我们发现在WT9-12细胞中过表达NHERF1后，细胞增殖明显受抑制，细胞凋亡增加，细胞阻滞于G0/G1期。过表达NHERF1可明显降低β-catenin转录活性，但是并不受NHERF1磷酸化的影响。过表达NHERF1后，β-catenin下游靶基因c-Myc和Cyclin D1蛋白和mRNA的表达亦减少。同时，周期蛋白Cyclin E表达减少，p21表达增多。表明NHERF1通过调节β-catenin的表达和转录活性以及部分细胞周期蛋白的表达，参与多囊肾病的发病。