miR-30a调控鼻咽癌转移的分子机制

MicroRNAs (miRNA) are a class of non-coding RNA that plays an important role in the development of cancer through posttranscriptional regulation of target gene mRNA.Our preliminary results have shown that miR-30a was downregulated in the nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell lines and clinical NPC tissue. Overexpression 0f miR-30a transfected with precursor could promote NPC metastasis and invasion and up-regulate the expression of N-cadherin. These results indicates that miR-30a plays very important role in the NPC metastasis. In the present study, to fully elucidate the mechanism of miR-30a, we will up-regulate miR-30a transfected with precursor in the NPC cell lines, then observe its effect on cell cycle, apoptosis, clone formation in vitro as well as tumorigenesis and tumor metastasis in vivo. Gene microarrays together with microRNAs targets prediction software will be used to screen the target gene of miR-30a, then luciferase reporter assay will be performed for confirmation.In this present study, we will clarify the functions of miR-30a and related genes that appear to contribute in the singal ways to the metastasis of NPC, as well as contribute to their diagnosis, prognosis, evaluation, and potentially, their treatment.

microRNAs在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用。我们的前期研究表明，miR-30a在鼻咽癌细胞系和石蜡组织鼻咽癌癌巢中低表达。且将miR-30a过表达后，可以促进鼻咽癌细胞的侵袭和转移，并上调N-cadherin表达。本项目拟在前期研究基础上，将通过系统分子生物学实验技术和动物实验，研究miR-30a表达下调的机制；通过转染miR-30a前体进入鼻咽癌细胞株，研究miR-30a前体转染细胞株的细胞周期、凋亡、克隆形成以及体内成瘤能力、转移影响；利用基因表达谱芯片、蛋白质芯片技术，结合miRNAs靶基因预测软件等预测miR-30a在NPC中特异性的靶基因，最后用荧光素酶基因报告系统验证并确证。明确miR-30a的靶基因及其相关的信号通路分子，从而探讨miR-30a在鼻咽癌中的分子机制。为鼻咽癌分子诊断、预后预测、疗效评估提供新的分子标记物和分子靶向治疗的新靶点。

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）是极具地方特色的恶性肿瘤，尤其以中国广东省最高发。其特点是绝大部分鼻咽癌患者在早期即发生颈部淋巴结转移，甚至转移至远隔器官。尽管NPC 对放疗敏感，但是由于发生局部复发、远处转移，往往导致治疗失败。因此对于监测NPC复发、转移的分子标记物就显得尤为重要。MicroRNAs（miRNAs）是近几年来在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码单链RNA 分子，通过与靶基因的mRNA的3’UTR碱基配对诱导降解mRNA或阻止其翻译，可以负性调节基因表达。研究表明miRNA表达异常与肿瘤的发生、发展密切相关，如miR10b是与细胞获得间质细胞表型和侵袭转移能力有关的miRNA；MiR21可以作用于多个肿瘤抑制因子；miR373和miR520c具有转移的特性，从而促进前列腺肿瘤的侵袭和转移。MiR30a在鼻咽癌中的表达及其功能，目前还不清楚。.本研究的主要内容采用定量PCR 和原位杂交检测鼻咽癌原发肿瘤和颈部淋巴结转移灶中miR30a 的表达情况；并收集鼻咽癌患者治疗前后、复发、转移前后的血浆，分别检测miR30a的表达。检测鼻咽癌细胞系miR30a的表达，并从体内外实验中研究miR30a的表达、功能等。利用多种microRNA靶基因预测软件，明确miR30a的靶基因和相关信号通路，采用荧光素酶基因报告系统验证miR30a靶基因。.本项目的重要研究结果：体内外实验证实miR30a在原发性鼻咽癌中低表达，然而在转移性鼻咽癌中miR-30a中高表达。miR30a通过靶向作用于E-cadherin表达，可能是导致鼻咽癌细胞的侵袭和转移机制之一。在临床研究方面，进行大样本的多中心分析，收集鼻咽癌原发性和转移性的患者血浆，研究发现转移性鼻咽癌患者的miR30a的表达升高，具有潜在性预测鼻咽癌转移的能力（文章正在前期写作中）。.通过本次研究，表明miR30a在鼻咽癌侵袭、转移中起着重要作用。其靶向作用于E-cadherin 的表达有可能成为鼻咽癌治疗的靶点。经过本次大量样本的临床分析miR30a有望成为检测鼻咽癌复发、转移的重要分子标记物。