转基因干细胞来源的肝细胞抗HCV感染研究

晚期肝细胞性肝癌（HCC）缺乏有效治疗手段。丙型肝炎病毒（HCV）感染是HCC重要危险因素之一；受肝者体内HCV往往导致HCC患者肝移植失败。人类胚胎干细胞（hESCs）、诱导多功能干细胞（iPSCs）的研究进展使得从基因及细胞水平治疗HCC成为可能。我们推测向患者输入可以抵抗HCV感染的干细胞使失代偿的肝细胞再生，将根本消除HCV所致HCC复发可能。我们前期研究发现，靶向作用于HCV保守序列的短发卡RNA（shRNA）或下调细胞表面受体CD81可以抑制HCV的复制；对病毒具有高亲和性纤连蛋白结合体（内抗体）可以抑制病毒感染。本项目研究中，我们将在hES或iPS内导入具有抗HCV复制能力的shRNA或内抗体，体外诱导这些细胞分化为肝细胞，并在FRG鼠中重建肝脏。通过体内、体外研究这些肝细胞的抗HCV能力，评价其抑制HCV所致肝细胞恶性转化的潜能。研究结果将为HCV相关HCC治疗提供新线索。

HCV是慢性、终末期肝病，包括慢性肝炎、肝硬化以及肝细胞性肝癌（HCC）的主要治病因素。受肝者体内HCV持续存在可导致HCC 患者肝移植失败。通过本项目研究，我们 构建了CD81 shRNA稳定敲除hES肝癌细胞株；建立了hES细胞分化为肝细胞实验方法；并评价了肝癌细胞中评估CD81缺失（通过导入shRNA）对HCV感染、复制的影响。研究结果支持通过抗HCV干细胞来源的肝细胞移植作为HCC患者治疗的可能性。此外，我们利用全基因组随机插入失活及第二代测序技术相结合的高通量筛选平台，构建了高分辨病毒遗传谱（High-resolution genetic profile of viral genomes）， 将15寡核苷酸库被随机插入HCV的基因组，并筛选出4个在抗IFN功能中具有关键作用的区域。研究结果将为HCV的抗病毒治疗提供新线索及新方法。.