PKCε信号通路对骨髓间充质干细胞归巢和旁分泌功能的影响及机制研究

干细胞移植治疗有两个瓶颈问题未解决：即移植干细胞归巢少，生存率低。PKCε在缺血性心脏保护中处于中心地位和关键环节，但它在干细胞归巢和生存中作用尚不清楚。本研究通过冠脉前降支结扎术建立大鼠急性心肌梗死模型，PKCε基因修饰骨髓间充质干细胞治疗，RT-PCR、免疫印迹分析SDF-1/CXCR4和PI3K通路信号蛋白变化；通过体外迁移实验和免疫荧光染色分析干细胞的迁移和募集；蛋白质芯片分析旁分泌因子变化；免疫荧光、激光共聚焦技术观察cTnI、vWF、SMA、VIII因子变化；串联亲和层析和质谱技术鉴定PKCε复合物成分并选择性证实，发现PKCε通路中可能在干细胞归巢和旁分泌中起重要作用关键蛋白；超声心动图、血流动力学评价心功能，从细胞和整体水平阐明PKCε信号对干细胞归巢和生存的作用及可能机制，加深对干细胞移植信号转导机制理解，为发现新的干预靶点和更有效地改善干细胞移植疗效提供重要线索和证据

干细胞移植治疗有两个瓶颈问题未解决：即移植干细胞归巢少，生存率低。我们首先通过real time RT-PCR、免疫印迹分析、流式细胞计数、蛋白质芯片等技术分析探讨了在体外PKCε对于骨髓间充质干细胞（MSCs）的迁移能力和旁分泌功能的影响及其可能的分子机制；然后通过冠脉前降支结扎术建立大鼠急性心肌梗死模型，以PKCε基因修饰MSCs移植治疗，通过RT-PCR、免疫印迹分析PKCε、SDF-1/CXCR4和PI3K通路信号蛋白变化，通过免疫荧光染色分析移植1d及移植4w后移植干细胞的分布；通过免疫荧光、激光共聚焦技术观察cTnI、vWF、SMA、VIII因子变化，通过RT-PCR和免疫印迹分析MSCs移植4w后VEGF、bFGF、TGFβ表达水平，通过超声心动图和组织形态学评价不同干预组心脏功能和心室病理性重塑情况。结果表明：PKCε通过增加MSCs的保留、生存和分化显著改善了急性心梗后的心功能不良和心室重塑，从而增强了MSCs移植的疗效，PKCε的这一作用部分是独立于SDF-1/CXCR4轴和PI3K/AKt通路实现的；对PKCε的干预可能成为增强MSCs移植疗效的新方法。具有创新性和科学性。本研究在三年研究期限内，如期地较好地完成了原定研究计划和研究内容，从细胞和整体水平阐明了PKCε信号对MSCs保留、生存和分化的影响及可能机制，加深了对干细胞信号转导机制的理解，为发现新的干预靶点和更有效地改善干细胞移植疗效提供了重要线索和证据。完成了预期研究结果及预期的人才培养目标和学术论文目标，实现了课题预期的科学价值和社会价值，圆满完成了国家自然科学基金课题任务。