造血干细胞发育相关miRNA的筛选及其诱导干细胞定向分化研究

微RNA(miRNA)是一类崭新的调控性非编码小分子RNA，在监控生物体个体发育和细胞增殖、分化进程中起着重要作用。基于miRNA参与造血干细胞发育进程并可诱导干细胞定向分化的新设想，本项目拟依据约200个人类miRNA序列，制作人类miRNA检测基因芯片；流式细胞仪分选人脐血造血干细胞及各系祖细胞，分离纯化18-100nt小RNA片段，经添加人工接头、反转录及荧光素标记后，与基因芯片分子杂交，获得造血干细胞发育相关(乃至特异的)miRNA序列，生物信息学分析miRNA序列特征、染色体定位并进行靶点预测；挑选4-5个在各系祖细胞表达上调的miRNA序列，基因重组构建真核表达载体并稳定转染造血干细胞，检测miRNA表达及定量检测靶基因表达水平，检测造血干细胞生物学特性、集落形成及细胞亚群比例，为分析miRNA调控造血干细胞发育分子机制、探索诱导造血干细胞定向分化新手段提供理论指导和实验依据。