乙肝病毒X蛋白通过下调Psen1依赖的Notch1信号通路促进肝癌发生的机制研究

我国为肝癌高发区，肝癌死亡率在各类肿瘤中高居第二位。慢性乙肝病毒（HBV）感染是我国肝癌发病的主要原因。乙肝病毒X蛋白（HBx）与肝癌的发生发展密切相关，然而其促肝癌发生的机制仍不十分清楚。Nocth1信号通路是一个进化上保守的信号传导机制，该通路经配体-受体结合、受体剪切，最终引起胞内活性ICN1水平上升，激活下游靶基因，Notch1通路异常可导致一系列疾病包括肿瘤的发生。我们的前期研究已证实：HBx通过下调Notch1通路中γ-secretase亚基Psen1表达，从而抑制Notch1被剪切，导致ICN1水平下降，抑制Notch1通路的活化，进而促进肝癌发生。然而，HBx下调Psen1的机制仍有待深入研究。本课题旨在研究HBx下调Notch1信号通路中Psen1表达水平的分子机制与信号通路，阐明HBx-Psen1-Notch1通路在HBV相关肝癌发生发展中的作用。

我们从以下几方面探讨了乙肝病毒相关肝癌的发病机制：在HBV相关肝癌中，乙型肝炎病毒大S蛋白（hepatitis B virus Large S protein, LHBs）和乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein, HBx）是肝癌组织中最常被检测到HBV相关蛋白。尽管已有部分研究证实LHBs和HBx可通过影响细胞本身信号通路来激活基因转录促进肝癌发生，然而对于LHBs和HBx在HBV相关肝癌（HBV-associated hepatocellular carcinoma, HBV-HCC）发生发展过程中的作用仍有许多不明之处。 首先，HBV-HCC高死亡率的一个原因是高转移率，但其机制还不清楚，获得失巢凋亡抵抗是肿瘤细胞侵袭转移的前提。PAK1作为一个关键的丝/苏氨酸激酶参与协调细胞骨架动态改变、病毒复制和失巢凋亡抵抗。我们发现HBV通过HBx蛋白诱导PAK1线粒体转位和增加与Bcl2结合从而赋予细胞失巢抵抗和锚定非依赖性生长的能力。此外，PAK1的转录激活和激酶活性参与HBx诱导的体内外失巢凋亡抵抗。PAK1过表达与HBV感染、门静脉癌栓形成正相关，PAK1高表达还预示着肝癌病人的不良预后。研究结果提示：HBx通过PAK1转录活化诱导失巢凋亡抵抗是解释HBV相关肝癌转移的一个潜在分子机制；其次，大部分HBV相关肝癌患者肝组织存在LHBs，LHBs转基因鼠能自发肝癌，但是LHBs在HBV相关肝癌发病过程中的作用还有待阐明。我们研究了LHBs在HBV相关肝癌发生中的作用和分子机制。肝癌细胞裸鼠移植瘤实验表明LHBs促进肿瘤形成，体外实验证实LHBs促进肝癌细胞增殖和克隆形成。通过对信号通路影响的分析提示LHBs激活PKCα/Raf1/Src/PI3K/Akt 信号通路。在体外干扰Src酪氨酸激酶能逆转LHBs表达所诱导的促进细胞增殖、G1/S进展和凋亡抵抗。更重要的是，Src抑制剂塞卡替尼在体内、体外逆转LHBs促进细胞增殖和肿瘤形成。最后，在人肝癌肿瘤标本中验证了LHBs表达与pSrc（Y416）、pAkt（S473）、增殖标志（Ki67）正相关。我们的结果提示LHBs通过活化Src/PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞肿瘤形成，提出了一个潜在的HBV相关肝癌发病机制，并为HBV相关肝癌的治疗提供了一个新的靶点。