与卵巢癌转移相关的Polycomb家族核心基因的筛选及其相关调控机制的研究

本研究将分别采用卵巢癌原发病灶和转移病灶的组织芯片，通过系统比对，研究卵巢癌原发病灶和转移病灶之间PcG基因家族所有蛋白（BMI1, MEL18, RING1, HPCs和EED, EZH2, Su(z)12，YY1和HPHs）的表达情况，筛选出与卵巢癌转移相关的核心PcG基因蛋白，并分析其临床意义。采用手术切除的卵巢癌原发病灶和转移病灶进行原代细胞培养，从基因序列测定，基因拷贝数、启动子区甲基化状态，microRNA和蛋白表达等多个层面进行系统的比对研究，探讨筛选出的与卵巢癌转移相关的PcG家族核心基因蛋白表达异常的相关机制。通过体外和体内实验，验证干扰或阻断相关的PcG家族核心蛋白表达后，卵巢癌细胞在浸润和转移方面的变化。本研究从干性基因的角度，阐明与卵巢癌转移相关的干性基因表达情况及其调控机制，为卵巢癌转移的诊断和治疗提供新的分子靶点和诊治思路。

研究背景：卵巢癌是病死率最高的妇科恶性肿瘤，其中，转移、复发是导致患者死亡的主要原因。近年来异质性再度成为肿瘤研究关注的热点。肿瘤在不断发生着异质性变化，用不变的治疗模式去治疗不断变化的肿瘤，显然不能达到彻底治愈的效果。卵巢癌也是一种异质性疾病，每一个卵巢肿瘤都可以被看成是许多遗传和表观遗传性状各异的细胞的集合。了解卵巢不同异质性亚群与肿瘤转移、复发及预后相关的分子表型和基因图谱特征，制定出有针对性的个体化治疗方案，对肿瘤的长期控制产生极其重要的促进意义。.研究内容：1. Polycomb家族蛋白(PcG 蛋白)在卵巢浆液性乳头状囊腺癌复发过程中的表达及临床意义。2. Polycomb家族蛋白的表达异质性导致上皮性卵巢癌细胞出现功能异质性。3. Polycomb家族蛋白异质性表达的相关调控机制。4.从人卵巢浆乳癌细胞系A2780和SKOV3中分别分离和筛选出具有不同侵袭、迁移能力的单细胞亚群；5.对筛选出的高、低侵袭单细胞亚群进一步进行转移相关表型特征的检测和验证，以明确其能否作为卵巢癌异质性相关机制研究的细胞模型模型；6.对2组高、低侵袭单细胞亚群，进行全基因组外显子测序(Exome Seq)分析和转录组测序（RNA Seq），筛选出可能与卵巢癌不同侵袭能力等肿瘤异质性产生有关的候选基因，为下一步的临床验证打下基础。.重要结果：卵巢癌在复发过程中存在肿瘤异质性，主要表现为PcG蛋白的表达异质性以及相应的遗传学和表观遗传学的改变。BMI1和EZH2的高表达是卵巢癌患者复发和生存时间的独立预测因子，独立于组织学分级和化疗敏感性。基因EZH2和miR-298有可能成为复发性卵巢癌靶向治疗的新靶点。人卵巢浆乳癌细胞系中存在着具有不同侵袭能力的异质性细胞亚群。A-H/S-H 与 A-L/S-L是较为理想的研究卵巢癌肿瘤内异质性的细胞模型。高侵袭能力的单细胞亚群具有更强的独立存活能力，可能在肿瘤的浸润，转移和耐药过程中发挥着更主要的作用。CNTNAP1基因突变,PI3K/AKT/mTOR信号传导通路激活及其相关基因的异常表达可能与卵巢癌不同侵袭能力等肿瘤内异质性的产生相关。但有关其作用机制和临床意义有待进一步的研究和验证。