基于舌苔微生态和TLR4信号通路的腻苔机制研究

Tongue diagnosis is the impotant diagnostic method of Traditional Chinese medicine (TCM) ，however，how to reflect the formation mechanism of the coating tongue of chronic atrophic gastritis with the scientific method is the hotspot the research of tongue diagnosis. Based on the micro ecological and TLR4 cell signal pathway, we plan to establishment of DGGE fingerprinting atlas of greasy fur in chronic atrophic gastritis by 16S RNA gene fingerprinting techniques looking for features of chronic atrophic gastritis ; based on Western Bloting and ELISA techniques, we plan to study the effect about tongue coating bacteria to TRL4 cell signal pathway，including of TLR4, P38MAPK, ICAM1, MCP-1 calcium to explore relationship between the formation greasy coating tongue and TLR4 cell signal pathway and microecological. The study can provide new angle and method to explain "tongue" theory using modern language.

舌诊是中医特色的诊断方法，用现代技术手段研究中医舌苔是舌诊客观化的研究方向。目前中医舌苔研究主要采用细胞化学、分子生物学等手段探讨舌苔与疾病的相关性，系统研究舌苔形成机制的较少。本课题以慢性萎缩性胃炎为切入点，利用16S rRNA基因指纹图谱技术对腻苔患者舌苔进行分析，寻找腻苔菌群结构变化特点，建立腻苔患者的微生态特征图谱；进一步从 TLR4信号通路出发，利用分子生物学技术方法，研究舌苔菌群对该通路的p38MAPK、ICAM1、MCP-1 、E-钙黏附因子等蛋白和黏附因子的影响，以期从舌苔微生态、TLR4信号途径及其关联性方面来阐明腻苔的形成机制。本项目对丰富中医舌诊理论具有重要的意义，为实现用现代语言阐释“舌诊”理论提供新的思路和方法。

为了探讨中医腻苔的内在物质基础，我们从微生态角度出发，采用16S rRNA基因指纹图谱技术，全面阐释腻苔的微生物群落结构组成及特点。本研究以慢性萎缩性胃炎为切入点，观察腻苔微生物群落与TLR4信号通路中相关因子的内在关系。结果显示：（1）正常人、慢性萎缩性胃炎腻苔与非腻苔患者的舌苔具有相似的微生物群落结构组成。门水平上优势物种（含量≧1%）主要是厚壁菌门（35.4%）、变形菌门（27.04%）、拟杆菌门（22.01%）、梭杆菌门（7.41%）、放线菌门（5.81%）；在属水平上优势菌属（含量≧1%）主要有12种菌属组成。三组在微生物群路组成上没有显著差异性；（2）通过PCA，PCoA和PLA-DA等方法显示正常组与慢性萎缩性胃炎非腻苔组，慢性萎缩性胃炎腻苔组和非腻苔组在微生物物种方面存在显著差异。以慢性萎缩性胃炎腻苔组和非腻苔为例，两者发现属水平差异微生物共226种，其中优势差异菌属（含量≧1%）为10种；同时我们也对TLR4信号通路的相关蛋白及下游的粘附因子测定，结果发现TLR4，MyD88，IRAK-1、ICAM-1及E钙粘附因子等在腻苔组的含量都明显升高，具有显著的差异；（3）为了研究两者之间的关联性，我们采用RDA/CCA和db-RDA方法对两者进行分析，结果显示TLR4、MyD88和微生物菌群具有显著相关性；（4）为了更加深入对舌苔微生物进行研究，我们又采用随机森林和network网络分析法，对舌苔微生物中对差异贡献度大的微生物物种进行筛选，结果显示Clostridium_sensu_stricto_1 ,Veillonellaceae和Abiotrophia三种菌属所占比重最大；同时我们也对微生物的功能进行预测，发现慢性萎缩性胃炎腻苔的患者的微生物功能与氨基酸代谢密切相关。. 本研究初步探讨了慢性萎缩性胃炎腻苔与微生物群落之间的关系，结果也提示慢性萎缩性胃炎腻苔组的舌苔微生物群落具有自己的结构组成特点，这可能与疾病的发生发展密切相关，这为进一步阐明腻苔的形成机制和实现用现代化语言阐释“舌诊”提供新的思路与方法。. 本研究共发表论文7篇，其中SCI 2篇。培养研究生3名，参加国内外重要学术会议11人次。