蛋白拆分与活性重建技术在在转EPSPS基因油菜上的应用

针对大面积种植转基因抗除草剂作物可能会对环境产生不良影响的问题，本研究探讨采用intein介导的基因拆分和蛋白质重建技术获得一种新型转基因油菜理论和实践体系。首先将来自草苷膦极端污染环境中荧光假单胞菌EPSPS基因拆分,并已获得EPSPS蛋白活性重建的适宜位点。然后将拆分后的两个基因片段（所编码多肽没有EPSPS蛋白质活性）分别与编码EPSPS基因到叶绿体的信号肽和Intein的片段连接，分别转入甘蓝型油菜核基因组和叶绿体基因组中，经有性杂交后，利用信号肽和Intein介导在油菜叶绿体中重建EPSPS蛋白活性，从而获得抗草苷膦的转基因油菜。最后在对重建的基因油菜EPSPS表达分析、花粉活力的测定、抗草苷瞵水平和农艺性状分析等基础上，提出一个转基因育种新方法。该项研究的成功对于获得新型转基因植物，降低转基因植物由于花粉漂移所引起的生态风险，杂交育种及知识产权保护具有重要理论意义和实际价值。