微小RNA hsa-miR-129抑制肾癌细胞增殖、转移和促进其凋亡的机制研究

现有的研究表明微小RNA（miRNA）和人类肿瘤的发生发展、增殖、转移、凋亡、治疗及预后密切相关。肾癌是泌尿系常见恶性肿瘤，易于转移，尤其对晚期患者有效治疗手段少，预后较差。迄今为止有关miRNA和肾癌的研究极少且仅局限于miRNA的组织表达谱，对肾癌相关的miRNA靶基因及作用机制缺乏深入研究。我们通过最新的Aligent miRNA芯片高通量地筛选了851个miRNA，结果发现：在肾透明细胞癌组织中一系列miRNA的表达被升高或下降，其中hsa-miR-129是下降最明显的miRNA。初步的研究发现hsa-miR-129具有明显抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的功能，但具体机制不清。本课题的目标就是深入研究hsa-miR-129调控肾癌细胞增殖、迁移、转移和凋亡的分子机制，目前国内外尚未见类似报道。通过本课题期望能加深对肾癌发病机制的认识，为发现新的治疗方法奠定基础。

本课题研究了miR-129-2、miR-141和miR-200c在肾癌发生发展中的临床意义、生物学作用及其分子机制。. 成熟的miR-129-3p在ccRCC和嫌色细胞型肾癌（chRCC）中明显下调，而miR-129-5p在ccRCC和chRCC中无明显变化。受试者工作特征曲线（ROC）显示miR-129-3p鉴别ccRCC与正常组织的曲线下面积（AUC）为0.735 (95% CI, 0.646 to 0.825)。而且，miR-129-3p表达水平越低，ccRCC患者的术后总体生存率和无病生存率均越低；过表达miR-129-3p能显著抑制肾癌细胞的迁移侵袭能力，但对细胞生长、周期、凋亡无明显影响。此外，过表达miR-129-3p能明显下调多个转移相关基因的表达，包括SOX4、p-FAK、MMP-2/9。miR-141在92.6% (63/68)的ccRCC中明显下调。ROC分析显示miR-141鉴别ccRCC与正常组织的AUC为0.93 (95% CI, 0.881 to 0.981)。体外细胞实验和裸鼠原位肾肿瘤体内实验均显示：过表达miR-141极大的降低了肾癌细胞的迁移侵袭能力，抑制细胞的生长，并将细胞阻滞在G0/G1期。最重要的结果是发现miR-141的抗肿瘤效应是通过负调控EphA2的表达来实现的，进而抑制了p-FAK，p-AKT和MMP-2/9的表达。此外，肾癌细胞中miR-141能分泌至细胞外，从而可能在受体细胞发挥一定的调控作用。miR-200c在ccRCC组织的平均表达水平明显低于正常组织（p<0.0001）。72对ccRCC组织中差异≥2倍的有70对。功能研究提示过表达miR-200c明显抑制肾癌细胞生长，并将细胞周期阻滞在G0/G1期，对细胞迁移侵袭能力也有一定抑制作用。而且，体内实验显示miR-200c能极大地抑制SN12-PM6细胞在裸鼠肾脏中的生长。首次发现CDK2是miR-200c的直接作用靶点。. 本研究已发表SCI论文两篇（Oncology Reports和Molecular Cancer Research），一篇被Clinical Cancer Research接受，一篇已投稿Carcinogenesis。培养博士研究生2名，在读博士生4名、硕士生1名。参加全国性会议分组发言5次。举办国家级学习班1次。