miRNA let-7e在动脉粥样硬化易损斑块中的作用及其分子机制

CD4+ T细胞是最重要的免疫调节细胞之一，我们首次在动脉粥样硬化（AS）斑块破裂患者CD4+ T细胞中发现miR let-7e明显上调，根据其靶基因预测分析我们推测Let-7e上调可能会加剧其抑制蛋白Lin28B及在抗炎/促纤维化中具有重要作用的细胞因子IL-10和IL-13的下调，使斑块炎症反应加剧、纤维帽变薄而易于破裂。为验证此假说，本申请将利用plused SILAC等技术发现并验证let-7e的靶基因，用亲和纯化和质谱的方法确定使let-7e上调的转录因子，并在AS小鼠模型上观察let-7e对AS易损斑块发展/破裂的影响。最终阐明let-7e在易损斑块中的作用及上下游调控的分子机制。本项目将使我们从miRNA和免疫调控的角度更好的理解易损斑块形成/破裂的分子机制，为发现易损斑块有效预警标志物和干预靶点提供新思路。

本课题基本按照项目执行计划，完成了计划任务书中规定的任务。利用设立阴性对照的改良的plused SILAC技术，在蛋白水平鉴定出let-7e在CD4+T细胞中可能的靶基因106个，并利用荧光素酶报告载体确证了其中IL-10、IL-13和LIN28B是let-7e的靶基因，还通过对这些潜在靶基因的分析，揭示了let-7e与代谢、免疫、凋亡密切相关的功能特征。然后初步揭示了在动脉粥样硬化患者外周CD4+T细胞中使let-7e上调的转录因子，阐明了let-7e在动脉粥样硬化斑块中上下游调控的分子机制，基本证实了本课题的科学假设。利用本课题的技术，我们还揭示了出血/缺血性脑卒中患者血浆中miRNA的变化特征，进一步明确了let-7e在AS导致的缺血性脑卒中患者CD4+T细胞中变化的特异性。从而揭示了以let-7e为代表的miRNA对CD4+ T细胞的调控，深化了人们对于miRNA对免疫调控的认识。此外，以本课题的研究技术和结果为基础，我们揭示了另一种在AS斑块中显著变化的miRNA-490-3p能够通过靶向PAPP-A调控血管平滑肌细胞增殖，在AS发生发展和易损性变化中发挥重要作用。上述研究结果有助于我们从miRNA和免疫调控角度深入理解AS易损斑块形成/破裂的分子机制。