红景天提取物红景天苷、洛塞维对Aβ寡聚作用的研究

Aβ42 oligomers induced oxidative stress is one of its important toxicity mechanisms contribution to AD pathological processes. The main Rhodiola’ active bioactive components salidroside can anti oxidative stress and exert neuroprotective effects in AD experiments. Whether It Can directly inhibit Aβ42 oligomerization to reduce the neurotoxicity is not clear until now. Natural compounds known to prevent Aβ oligomers have a hydroxyl group or Polyphenol, which have the similar group with salidroside and rosavin. Project applicant pre-electrophoresis data show Salidroside could inhibit Aβ42 Oligomerization. This project will focus on Salidroside and Rosavin effect β- amyloid oligomerization. Using transmission electron microscope (TEM), Western Blot, circular dichroism, Thioflavin-T(THT) fluorescence detection, laser scanning confocal microscope(LSCM) and cell toxicity test to clarify inhibition oligomeric effect and mechanism of salidroside and rosavin. These results may provide a new target for drug selecting for the prevention and treatment of AD and other neurodegenerative diseases, and may provide valuable reference for the development and application of Rhodiola.

Aβ42寡聚体诱导氧化应激是AD病理过程中的重要毒性机制之一，红景天主要提取物红景天苷在AD研究中具有抗氧化应激的作用，但红景天苷能否直接阻止Aβ42寡聚来抗氧化及缓解神经毒性并不清楚。已知的具有阻止Aβ寡聚的天然化合物都具有环状羟基和多酚结构，这正与红景天苷、洛塞维相似，项目申请人前期的电泳数据显示，红景天苷具有阻止Aβ42寡聚的功能。本项目将通过透射电镜、Western Blot、圆二色光谱、THT荧光检测、激光共聚焦显微镜及细胞毒性实验等一系列方法来阐明红景天苷及洛塞维抑制Aβ42寡聚的作用及机制，研究结果可能为AD及其它神经退行性疾病的防治提供新的药物筛选对象，还将为红景天的开发应用提供很有价值的参考。

β淀粉样蛋白（Amyloid βpeptide, Aβ）异常聚集被认为是阿尔茨海默症（Alzheimer Disease, AD）病理过程的主要事件之一，但β淀粉样蛋白聚集体形式多样，且聚集机制不详，发挥毒性的作用机制也不清楚。因此，认识β淀粉样蛋白聚集和组装机制，并探求小分子抑制其聚集成为研究AD的重要方向。本项目通过透射电镜、Western Blot、圆二色光谱、Thioflavin-T（ThT）荧光检测、激光共聚焦显微镜及细胞毒性实验等一系列方法阐述β淀粉样蛋白聚集的组装机制，探索β淀粉样蛋白聚集体的检测办法及β淀粉样蛋白发挥毒性作用的效果和机制，并检测藏药红景天主要提取成分多酚类物质红景天苷和络塞维对β淀粉样蛋白聚集的抑制效果。通过一系列实验得到一些关键数据和重要发现：（1）Aβ短肽实验显示，在其分子内部形成了稳定的β-发夹结构，在Aβ寡聚和纤维化过程中起到重要作用；（2）化合物BS3可以交联并稳定Aβ聚集体，并可以帮助检测细胞膜内和膜外的聚集体；（3）酸性pH条件是β淀粉样蛋白产生后从细胞膜上脱落的重要原因；（4）β淀粉样蛋白寡聚体主要通过内吞而不是通过神经元细胞膜磷脂相互作用，这是因为，β淀粉样蛋白寡聚体被内吞后的毒性作用很可能是其发挥毒性的关键过程，β淀粉样蛋白寡聚体与细胞膜的作用力很弱且结合量很少，这解决了β淀粉样蛋白寡聚体与细胞膜作用方式长期以来的争论；（5）红景天苷对于抑制β淀粉样蛋白聚集没有明显的作用，但络塞维对于Aβ的聚集可以起到抑制作用，但这种抑制效果随着时间的延长被消除。这些研究结果对于β淀粉样蛋白聚集和组装机制，检测方法，小分子抑制其聚集，以及β淀粉样蛋白聚集体与细胞膜相互作用方式等方面的认识和理解有了更加清晰的认识，进一步阐明了β淀粉样蛋白在阿尔茨海默症中的作用，为人们研究AD提供了重要的理论基础。