"胆汁外引流"调控失血性休克大鼠"肠-肝-肺"内血红素加氧酶-1表达的实验研究

休克并发MODS的根源是细胞因子过度释放。血红素加氧酶-1(HO-1)和"胆汁外引流"均可调控多器官内细胞因子释放而防止MODS，且胆汁外引流有诱导HO-1高表达的可能，但两者内在联系尚未明确。本研究首先采用体外模拟缺氧(氮气 90%、二氧化碳10%)模型，将大鼠肠上皮细胞(IEC-6)与失血性休克大鼠胆汁一起培养，其上清液分别加入缺氧状态下的肝Kupffer细胞和肺毛细血管内皮细胞内，测定3种细胞培养上清液内的HO-1 mRNA、NF-κB蛋白表达、TNFα、HMGB-1和IL-10 mRNA。其次采用休克大鼠模型以及HO-1 siRNA干扰技术探讨"胆汁外引流"后，肠、肝和肺脏内HO-1 mRNA表达状态及其对脏器功能的保护作用。最后将正常大鼠胆汁注入行"胆汁外引流"的休克大鼠十二指肠内，观察胆红素缺乏对肠道屏障的影响。该研究目的是弄清"胆汁外引流"阻断"肠-肝-肺"细胞因子轴的机制。

创伤是青壮年劳动人口死亡的主要原因之一。失血性休克是创伤患者死亡的首要因素。我们前期的研究结果表明，“胆汁外引流”可减轻大鼠失血性休克时多器官功能损伤。应激状态下，血红素加氧酶-1（HO-1）通过抗炎、抗氧化和维持微循环正常功能等机制保护细胞。根据理论推测，“胆汁外引流”后胆红素的肠肝循环降低可反馈于胆红素形成的途径而有可能诱导机体代偿性增加HO-1表达升高。在本研究中，我们运用ELISA、Real-time RT-PCR、Western Blotting、免疫组织化学、组织病理评分等方法从功能学、形态学、分子生物学的角度检测了失血性休克胆汁外引流后肠屏障功能的改变，胆汁外引流后肝脏中HO-1表达的变化，失血性休克胆汁外引流后多器官功能改善与HO-1的关系。结果显示胆汁外引流减轻失血性休克时肠屏障功能损伤，导致肝脏中HO-1表达增加。胆汁外引流通过诱导HO-1升高减轻失血性休克时多器官功能损伤。