大黄附子汤对失血性休克复苏后致炎通路肠-肝-肺轴干预作用的机制研究

.The clinical observations show that intestinal endotoxemia after hemorrhagic shock (HS) resuscitation often leads to multiple organ dysfunction syndrome (MODS).In our previous researches,Dai Huang Fu Zi Tang(DHFZT) could effectively refrain the occurrence and development of MODS,which related to not only the the protection of intestinal mucosal barrier function but also intervention and regulation of inflammatory pathways gut-liver-lung axis. We use miniature pigs and SD rats as the research object,and establish the model of the HS and superior mesenteric vein and inferior vena cava flow, which treated with DHFZT after resuscitation. To use color doppler ultrasound measure of hepatic blood flow for controlment of portal vein perfusion.Surrounding the change of endotoxin content,degree of lung injury and tissue morphology of bowel,liver and lung,we use iTRAQ technology for screening diversity,and use bioinformatics methods for building protein interaction network,and find protein′place in the biological pathways.Using a laser confocal microscopic system combining with qRT - PCR method for validatiing protein expression,especially structure and function of the KC in liver.The study is aim to ①liked-allergic-reaction of enterogenous endotoxin and the role of the liver when hemorrhagic shock; ②the mechanism and regulatory networks of the effect of enterogenous endotoxin by DHFZT after HS resuscitation, which lay the theoretical foundation for the clinical applications of DHFZT.

临床观察显示，失血性休克（HS）复苏后常合并肠源性内毒素血症，进而导致复苏后多器官功能障碍综合征（MODS）。我们前期研究发现大黄附子汤能有效地遏制MODS的发生、发展，其作用除对肠黏膜屏障功能的保护外，还涉及对致炎通路肠-肝-肺轴的干预与调节。我们以小型猪及SD大鼠为研究对象，建立HS及肠系膜上静脉与下腔静脉转流模型，复苏后施以大黄附子汤治疗。用多普勒超声监测肝脏血流以控制门脉灌注；围绕内毒素含量变化、肺损伤程度及肠肝肺组织形态学变化，用iTRAQ技术筛选差异性蛋白质，利用生物信息学方法，构建差异蛋白间相互作用网络，寻找其在生物学通路中的位置，共聚焦显微系统结合RT-PCR等方法验证差异蛋白质表达，尤其肝脏转流与否的肝KC细胞结构与功能的变化以探讨①HS时肠源性内毒素的"类超敏"反应及肝脏的作用；②大黄附子汤对HS复苏后肠源性内毒素的作用机理及其调控网络。为大黄附子汤的临床应用奠定基础。

失血性休克（HS）复苏后常合并肠源性内毒素血症，进而导致多器官功能障碍综合征（MODS）。临床应用发现大黄附子汤（DHFZT）可降低HS患者病死率，减轻并发症等。前期研究表明DHFZT对HS复苏后影响还涉及致炎反应通路，即肠-肝-肺轴的调节作用，但具体机制仍不清楚。为此，课题组历时四年研究，取得了系列成果：（1）采用Meta分析发现中医药联合西医常规治疗较单纯的西医常规治疗更能降低HS死亡率，减少MODS发生率，在稳定心率，增强心功能，改善肾脏血流灌注方面具有明显的优势。（2）DHFZT治疗HS大鼠，可增加肠道血流，降低血清内毒素、脂肪酸结合蛋白含量，下调磷酸化血管扩张刺激磷蛋白（p-VASP）表达，上调黏膜闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达，减轻肠道黏膜损伤程度，结果表明，DHFZT可通过调控p-VASP、ZO-1蛋白表达，减轻HS复苏后肠道粘膜屏障损伤。（3）HS复苏引发了胃、回肠和升结肠菌群失调，对乙状结肠菌群并没有影响。HS复苏造成胃粘膜内菌群丰富度显著降低，乳酸菌属相对丰度过度增殖。在HS复苏24h时，升结肠粘膜上普雷沃氏菌属相对丰度显著增高。DHFZT通过抑制普雷沃氏菌属的过度增殖，降低了内源性感染的风险。在HS复苏12、24h，回肠末端肠粘膜上乳酸菌属相对丰度显著升高，但在HS复苏48h，当回肠末端肠粘膜上乳酸菌属相对丰度恢复正常时，厌氧菌丰度显著增加，拟杆菌属、Alistipes和LPS的增高呈正相关。(4)肠源性脓毒症腹腔渗液可导致急性肺损伤，其中LPS是炎症介质的启动因素，而TNF-a及IL-6是肠源性脓毒症导致急性肺损伤的主要因素，腹腔渗液经肝脏作用与否，肺损伤的程度不同，提示肝脏在肠源性脓毒症肺损伤中的发生发展中起关键作用。（5）HS大鼠肺脏AQP5蛋白及CC16蛋白参与急性肺损伤过程，DHFZT可以通过上调肺组织AQP5蛋白及CC16蛋白表达，减轻HS后急性肺损伤的程度，有效防治HS的进展。（6）肠源性内毒素血症早期即引发严重肺损伤，其原因可能与枯否氏细胞被激活，大量致炎因子的“瀑布”样释放有关。内毒素对肺脏的直接刺激，可能启动了机体肺脏保护。