胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠胆汁酸受体表达的作用

胆汁内引流解除梗阻性黄疸优于外引流的机制不明。我们前期研究发现胆汁内引流较外引流可致大鼠枯否细胞iNOS mRNA及CD14 mRNA表达下调；胆汁酸干预能拮抗内毒素对枯否细胞功能的影响，推测胆汁酸在改善枯否细胞功能，恢复肠道粘膜屏障等方面起到了决定性作用。本项目拟采用S.D.大鼠100只，分为梗阻性黄疸、胆汁内、外引流及对照共4组，利用Western blotting、RTQ-PCR等方法，一方面针对枯否细胞检测：1、胆汁酸膜受体TGR5及其mRNA的表达；2、枯否细胞内cAMP含量；3、细胞因子IL-6 mRNA、TNF-a mRNA的表达；探讨胆汁酸改善枯否细胞功能的机制。另一方面检测胆汁酸核受体FXR及其mRNA在回肠的表达，探讨胆汁酸恢复肠道粘膜屏障和免疫功能的机理。通过以上两方面研究，进一步阐明胆汁内引流解除梗阻性黄疸优于外引流的机制。

背景和目的：梗阻性黄疸（Obstructive Jaundice，OJ）患者术后并发症多。前期研究发现胆汁内引流较外引流术优越。本研究目的是通过观察大鼠肠黏膜屏障、总胆汁酸及其受体FXR和细菌移位的变化，肝脏Kupffer细胞TGR5及TGR5 mRNA表达情况探讨胆汁内引流术优于外引流术的机制，为临床治疗方式的选择提供实验依据。.材料与方法：采用成年雄性Sprague–Dawley大鼠200只，随机分为4组：SH组、OJ组、ED组和ID组。取静脉血做细菌培养，用ELASA法检测血清TBA并计数白细胞数目（WBC）和肺组织匀浆肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)含量。取末端回肠观察肠绒毛组织形态学变化，免疫组化检测Occludin和FXR表达，Kupffer细胞TGR5和肺组织Toll样受体4 (TLR4)的表达情况。通过实时荧光定量PCR技术测定各组大鼠Kupffer细胞胆汁酸受体TGR5 mRNA表达情况。.结 果：胆管梗阻形成后OJ组WBC、TBA、Chiu肠黏膜损伤评分和血培养细菌阳性率较假手术组WBC、TBA、Chiu评分和细菌阳性率均明显升高（P＜0.05），肺组织TLR4表达增加, 而肺组织TNF-ɑ浓度下降。而FXR和Occludin表达较假手术组均明显下降（P＜0.05）。行胆汁内引流术后，肠绒毛高度、FXR和Occludin表达均与对照组无显著差异。ED组WBC、TBA、绒毛高度、Chiu评分、FXR和Occludin表达均与SH组差异显著（P＜0.05），血培养细菌阳性率增加至（80%）。肺组织TLR4表达明显受到抑制，而TNF-ɑ浓度明显升高(P = 0.006)，但比ED低。ID组TGR5表达明显下调，与OJ组比较差异显著，但与SH组无差异；ED组与OJ组比较无差异（P=0.062）。ED组肺组织TLR4表达几乎无变化，而TNF-ɑ浓度明显升高(P = 0.005)。.结 论：梗黄形成后，胆汁大量淤积造成全身炎症反应，同时肠道缺乏胆汁使FXR表达减弱，肝脏Kupffer细胞TGR5及其mRNA表达显著增强，肠黏膜屏障受损进而导致细菌移位。胆汁内引流术解除了梗阻且恢复了胆盐的肠肝循环，FXR表达增加，全身炎症反应减轻，受损的肠黏膜屏障修复较好。而外引流术虽然也解除了梗黄但是胆汁大量丢失，受损的肠黏膜屏障修复差，细菌移位率大大增加。.