马尔尼菲青霉菌激活HIV潜伏感染的免疫机制研究

Yunnan province is the AIDS epidemic disaster area in China,and Penicilliosis maneffei (PSM) is an important cause of death among AIDS patients. Clinical studies show that HIV viral load raise obviously and the numbers of CD4+T lymphocytes decline dramaticly among AIDS patients with PSM.Antifungal therapy combined with early HARRT treatment could significantly reduce the mortality.Our previous research showed that Penicillium maneffei(PM) could promote HIV infection and replication by DC, and the supernatant of mature DC cells stimulated by PSM could activate HIV latency cell line.Our results suggest the activation of HIV latency Library may be related to therapidly worsened condition among AIDS patients with PSM. This project intends to verify the mechanism by in vivo and in vitro experimental systems.During treatment time 0,0.5,1,3,6 months,we will detect dynamicly immune cells amounts and function, HIV viral load and HIV latency Library, clinical indicators and prognosis,cytokines level.The results could explain the immunological mechanism of HIV latency activated by PM. And molecular mechanisms of HIV latency activated by PM will be illustrated in vitro study. The study should clarify the rapid deterioration mechanism of AIDS patients with PSM,.and provide the theoretical basis for optimization treatment.

云南省是艾滋病流行重灾区，马尔尼菲青霉菌病（PSM）是本地区艾滋病患者的重要死亡原因，临床研究提示艾滋病合并PSM患者病毒载量显著上升，CD4+T淋巴细胞数量急剧下降，抗真菌治疗基础上尽早联合抗病毒治疗可显著降低患者病死率。我们前期研究发现马尔尼菲青霉菌（PM）可通过DC促进HIV的感染和复制，且经PM刺激成熟的DC上清可激活HIV潜伏感染细胞系。提示HIV潜伏库的激活可能与艾滋病合并PSM患者病情急剧恶化相关。本项目拟采用体内和体外两个实验体系进行印证研究：于治疗前及治疗后0.5、1、3、6月进行免疫细胞数量及功能，病毒载量和潜伏病毒库变化，临床指标及预后，细胞因子动态研究，以阐明马尔尼菲青霉菌激活HIV潜伏感染相关的免疫学机制；并通过体外实验探索PM激活HIV潜伏感染相关的分子机制。从而阐明PM感染导致艾滋病患者病情急剧恶化的机制，为优化艾滋病合并PSM的治疗提供理论依据。

马尔尼菲篮状菌（Talaromyces marneffei，T. marneffei）是艾滋病患者特有的深部机会性致病菌，不及时治疗死亡率极高。目前T. marneffei感染的发病机制以及感染后病情急剧恶化的机制尚不清楚。本项目围绕“艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病的固有免疫变化及抗菌机制”这一主题，以云南省艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病患者为研究对象，动态研究艾滋病继发感染T. marneffei后的免疫学变化特征，开展了动态监测艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病患者不同治疗阶段机体免疫细胞和炎症因子、病毒学指标及其与预后的关系。同时我们还通过体外T. marneffei刺激巨噬细胞系探索巨噬细胞抗T. marneffei机制。我们发现：（1）艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病患者适应性免疫功能严重受损，固有免疫细胞源性的细胞因子及趋化因子对艾滋病患者抗马尔尼菲篮状菌感染至关重要，尤其是巨噬细胞相关的细胞因子；（2）过度激活和渗出的炎性细胞因子（炎症因子风暴）与患者不良预后相关；（3）适应性免疫缺损时，固有免疫细胞，尤其是巨噬细胞对抗马尔尼菲篮状菌感染至关重要，T. marneffei可激活NLRP3/Caspase-1/gasdminD通路而诱导巨噬细胞焦亡；（4）发现免疫调节剂沙利度胺在马尔尼菲篮状菌作为焦亡“触发物”时，可进一步促进巨噬细胞焦亡，体外初步尝试采用免疫调节剂联合抗真菌制剂治疗期待改善疾病预后；（5）部分艾滋病患者可出现免疫重建炎症综合征，我们发现早期启动ART可以减少免疫重建失败，据此优化了治疗方案并应用于临床，成功治疗艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病患者；（6）基线CD4+ T细胞计数和基线CD4/CD8比值可以作为有效预测ART后免疫重建和马尔尼菲篮状菌病的深部真菌感染风险指标。.这些研究结果对进一步深入了解马尔尼菲篮状菌病导致患者病情迅速恶化甚至死亡的免疫学机制奠定了坚实基础，为临床诊断及改善疾病预后提供了理论数据和可能的治疗靶点。项目执行期间发表论文8篇，其中SCI论文4篇、中文核心期刊4篇。培养毕业的硕士研究生4名，在读博士研究生1名。